北上廣深的疫情防控逐漸放開了，師兄也終于順利畢業(yè)了,。臨行前實驗室?guī)熜值芙忝靡黄鸪粤祟D踐行飯,，飯桌間除了對師兄表示熱烈祝賀之外，剩下的就是我們的滿腹牢騷和對未來的迷茫擔(dān)憂,。師兄看著我們一副副未老先衰的面孔,，語重心長地說：“世界上沒有什么無心插柳，有的只是努力奮斗之后的水到渠成”,，然后指著自己的額頭,，“看這發(fā)際線都后移到頭頂了，你們的都還在哈,。”,，氣氛活躍之際，師兄從懷里掏出一本筆記本秘籍,，“這本筆記本秘籍就留給你們參考吧,，里面記錄了我這數(shù)年動物實驗的避雷指南，希望對你們有用”,，說完交到我手里,，風(fēng)度翩翩消失在黑夜里……

我如獲珍寶，伴著大家的默默期待下,，打開了秘籍第一頁——乳腺癌動物造模避雷指南,，這正好和我開展的課題相關(guān)，我激動得熱淚盈眶,，這對我來說,，無異于雪中送炭！這一刻,，覺得作為一個基層科研求學(xué)女,，也有救了,！

這個世界對女人有太多的要求，既要上的廳堂,，又要下的廚房,；既要美貌如花，還要能掙錢養(yǎng)家,。職場家庭里受到委屈,，在面對娃的那一刻，忍一時,，內(nèi)分泌紊亂,，退一步，乳腺增生,，甚至癌變……

世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構(gòu)在報告中指出,，2020 年乳腺癌成為全球發(fā)病率最高的癌癥[1]，最新研究發(fā)現(xiàn),，全球每 76 s 就有一位乳腺癌確診患者,，這極大威脅了女性的生命健康和生活品質(zhì)^[2]。而動物模型( animal model of human diseases)是現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)研究中極為重要的一種實驗方法和手段^[3],，通過動物模型能方便,，高效地認識人類疾病的發(fā)生、發(fā)展規(guī)律和研究防治措施^[4],。

乳腺癌動物模型可選動物有常規(guī)小鼠,、大鼠、轉(zhuǎn)基因鼠,、免疫缺陷鼠,、犬、豬,、兔和斑馬魚等,。由于大、小鼠繁殖能力強,、飼養(yǎng)條件低,、實驗操作簡單等，應(yīng)用最為廣泛,。

制備小鼠乳腺移植瘤模型,，可通過皮下注射、尾靜脈注射,、乳墊以及心內(nèi)注射 4 種方法,，最終發(fā)現(xiàn)乳墊注射制備的乳腺癌模型與臨床病理較類似，比較適合藥理學(xué)評價和疾病機制的研究^[5]。目前男性乳腺癌( MBC) 是一種罕見的惡性腫瘤,，其死亡率遠遠高于女性^[6],。最近幾年，男性乳腺癌的發(fā)病率竟然也呈現(xiàn)出升高的趨勢[7],，而在動物造模時多用雌性小鼠,，雄性的生理特點與患乳腺癌的內(nèi)在聯(lián)系值得科學(xué)家們更深入研究探討,。

4T1 細胞乳腺癌動物造模避雷指南 

4T1 細胞株因其惡性程度高易成瘤,，自發(fā)向肺、肝,、腦等部位轉(zhuǎn)移成為廣泛使用的移植瘤細胞,。此外，4T1 細胞移植瘤模型的生長狀態(tài)及轉(zhuǎn)移部位與人類晚期乳腺癌非常類似,，該模型被廣泛應(yīng)用于評估晚期乳腺癌藥物的研究,。

然而細胞注射成瘤模型看似簡單，最終的成瘤效果漂不漂亮跟諸多因素密切相關(guān),。師兄的秘籍里面全方位地總結(jié)了他的研究歷程,，現(xiàn)在來跟大家一一分享：

1、腫瘤測量：4T1 細胞皮下接種成瘤,，移植瘤的大小通過測量腫瘤的長徑和短徑尺寸計算而來,，不同實驗者對同一腫瘤的測量結(jié)果無法從客觀上統(tǒng)一，因此建議始終由同一人進行腫瘤測量,，減少因不同人測量造成體積測量的誤差,。

2、接種細胞數(shù)目：在細胞數(shù)目方面尚未有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn),。從部分文獻的統(tǒng)計結(jié)果來看,，細胞數(shù)目的使用范圍在 3×104～ 1 × 107個/只小鼠之間，跨度可達 300 倍以上,，這必然會影響藥效評價,，不利于臨床轉(zhuǎn)化。細胞數(shù)目的選擇與多個方面密切相關(guān),，諸如移植瘤的類型( 原位或皮下) ,、植瘤方式( 直接注射或者手術(shù)植入) 、實驗?zāi)康?/span>( 抑制轉(zhuǎn)移或者抑制原發(fā)灶) 等,。作為一個折中方案,，( 0. 3 ～ 1. 0) ×106個/只小鼠的細胞數(shù)目值得考慮。

3,、細胞濃度：在確認細胞數(shù)目的前提下,，細胞濃度對植瘤效果也有顯著影響。其影響往往是隱性的，比如細胞被懸浮在分散介質(zhì)中有自發(fā)聚集沉淀的傾向,，細胞濃度越大沉淀可能越快; 細胞過密也會影響自身活性,，最終導(dǎo)致移植瘤不均一。細胞濃度由細胞使用數(shù)目與注射體積確定,，在一般的移植瘤模型中注射體積多為 100ul,，因此細胞濃度在 107級別及以下較為合理。

為了保證模型均勻,、藥效評價客觀,，在實驗過程中仍需注意某些問題: ( 1) 最好將細胞按每只小鼠的注射量單獨分裝; ( 2) 臨注射前輕柔吹打使細胞充分分散; ( 3) 在盡量短的時間內(nèi)用完細胞，防止活性降低影響成瘤,。

4,、小鼠周齡的選擇：小鼠的年齡與體重由植瘤方式和位置決定，多數(shù)研究采用 4 ～ 6 周齡,、體重 18～ 22 g 的小鼠,，然而這并非最佳選擇。如果構(gòu)建皮下瘤模型,，4 ～ 6 周齡的小鼠足以滿足要求; 若是制作原位瘤采取脂肪墊注射的方法,，此時小鼠的乳腺發(fā)育不夠充分，接種時容易漏掉細胞,。因此,，7 ～ 8周齡的小鼠更適合原位脂肪墊注射。

今天的知識分享就到這啦,，更多動物科研服務(wù),，歡迎致電：0755-86325431.

參考資料：

[1] Latest global cancer data: Cancer burden rises to 19. 3 million new cases and 10. 0 million cancer deaths in 2020． ［J / OL］ https: / / www． iarc． fr / fr / news-events / latest-global-cancer-data-cancer-burden-rises-to-19-3-million-new-cases-and-10-0-million-cancer-deaths-in-2020 / ．

[2]何玲，徐佳,，羅弘杉,，等． 體內(nèi)外乳腺癌模型的研究進展［J］． 腫瘤，2020,，40( 10) : 725－732．

[3]苗明三,，馬林納，彭孟凡,，等． 中醫(yī)藥動物模型研究現(xiàn)狀［J］． 中國比較醫(yī)學(xué)雜志,，2022，32( 1) : 141－146．

[4]王梓儀,，黃淑敏,，張倩，等． 基于中西醫(yī)臨床病癥特點的甲狀腺功能亢進癥動物模型分析 ［J］． 中國實驗方劑學(xué)雜志,，2022,，28( 6) : 192－198．

[5]孫麗華，崔海峰，彭博,，等． 4 種方法制備小鼠乳腺癌移植瘤模型的比較研究 ［J］． 中國新藥雜志,，2020，29 ( 4) : 449－455．

[6]Fentiman IS,，Fourquet A,，Hortobagyi GN． Male breast cancer［J］． Lancet，2006,，367( 9510) : 595－604．

[7]Abdelwahab Yousef AJ． Male breast cancer: epidemiology andrisk factors ［J］． Semin Oncol,，2017，44( 4) : 267－272．