圖1：DNA損傷示例圖（圖片來(lái)自網(wǎng)絡(luò)）

彗星實(shí)驗(yàn)（Comet assay）也被稱(chēng)為單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)（Single cell gel electrophoresis，SCGE）,，是一種在單細(xì)胞水平上檢測(cè)DNA損傷的技術(shù),。

 真核細(xì)胞DNA分子量大，以超螺旋結(jié)構(gòu)存在于細(xì)胞核中,。用瓊脂糖凝膠將細(xì)胞包埋后,，在細(xì)胞裂解液中，細(xì)胞膜,、核膜等生物膜結(jié)構(gòu)被破壞,，細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、RNA及其他成分進(jìn)入凝膠中,，然后擴(kuò)散到裂解液中,。但核內(nèi)的DNA仍然纏繞在核骨架上并留在原來(lái)的位置。在堿性電泳液中（PH>13）,DNA雙鏈解螺旋,，且變性為單鏈。電泳中,，如果DNA沒(méi)有損傷,，則將停留在原位,，染色后呈圓形的熒光團(tuán),，無(wú)拖尾出現(xiàn)。如果DNA受損,，斷裂的碎片進(jìn)入到凝膠中,，在電場(chǎng)的作用下，DNA碎片離開(kāi)原位向陽(yáng)極遷移,，形成拖尾,。DNA受損越嚴(yán)重，斷裂越多,，產(chǎn)生的碎片就越多,、越小，則向陽(yáng)極遷移的DNA碎片量就越多,，遷移距離也越長(zhǎng),，熒光染色后就能看見(jiàn)彗星樣尾長(zhǎng)并且熒光強(qiáng)度增強(qiáng)（彗星樣細(xì)胞示意圖如圖2）。通過(guò)相應(yīng)軟件分析如出現(xiàn)的彗尾長(zhǎng)度,、彗尾熒光強(qiáng)度等就可以得到該細(xì)胞DNA損傷程度,。

圖2：彗星樣細(xì)胞示意圖

各實(shí)驗(yàn)室彗星實(shí)驗(yàn)步驟略有不同，本公司所用步驟如圖3,。

圖3：彗星實(shí)驗(yàn)步驟

 彗星實(shí)驗(yàn)染色后拍照,，如果DNA沒(méi)有損傷則會(huì)看見(jiàn)圓的熒光團(tuán)，沒(méi)有拖尾,；如果DNA有損傷,，則會(huì)看見(jiàn)如圖4所示的彗星樣的拖尾。

圖4：彗星實(shí)驗(yàn)染色后拍照

在拍照時(shí)以tif格式保存圖片,，然后用CASP彗星分析軟件分析,。常用的指標(biāo)包括：尾部DNA百分?jǐn)?shù)、尾長(zhǎng),、彗星長(zhǎng),、尾矩、Olive尾矩等,，如圖5,。 

圖5：彗星實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

此外，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,，和對(duì)照組比較還能得到彗星樣細(xì)胞形成率或稱(chēng)細(xì)胞彗星率,。如果用不同藥物或不同濃度處理細(xì)胞，還能得出藥物或者濃度對(duì)應(yīng)圖,。如果是用藥物濃度梯度處理細(xì)胞,，還能得出DNA損傷的劑量-效應(yīng)關(guān)系圖等。

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