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腦垂體切除模型構(gòu)建與研究

發(fā)布時(shí)間:2024-04-19
去垂體動(dòng)物模型為觀察外源性垂體激素的上述活性提供了一個(gè)手段,,已用于生長(zhǎng)激素,、促腎上腺皮質(zhì)激素等的活性測(cè)定,是神經(jīng)內(nèi)分泌研究中非常有用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型之一,咽旁入路大鼠腦垂體切除術(shù)是建立模型較為常用的方法,。

垂體,,位于丘腦下部的腹側(cè),為一卵圓形小體,,由前中后三葉組成,,分泌10種含氮激素,與動(dòng)物的生長(zhǎng),、性別,、代謝、泌乳,、血壓及色素形成密切相關(guān),,是身體內(nèi)最復(fù)雜的內(nèi)分泌腺,所產(chǎn)生的激素不但與身體骨骼和軟組織的生長(zhǎng)有關(guān),,且可影響內(nèi)分泌腺的活動(dòng),。

去垂體動(dòng)物模型為觀察外源性垂體激素的上述活性提供了一個(gè)手段,已用于生長(zhǎng)激素,、促腎上腺皮質(zhì)激素等的活性測(cè)定,,是神經(jīng)內(nèi)分泌研究中非常有用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型之一,咽旁入路大鼠腦垂體切除術(shù)是建立模型較為常用的方法,。

 

一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

可選用SPF級(jí)雄性SD大鼠

 

二,、麻醉與術(shù)前準(zhǔn)備

制備方法:大鼠經(jīng)3%的戊巴比妥鈉(0.16ml)腹腔注射麻醉,,仰臥位放置,利用門(mén)齒將頸部牽引拉直,,上頸部消毒剃毛,。

顱鉆:(直徑1.8mm),在離鉆頭端1.0~1.5mm處用透明膠布裹一寬約6mm,、厚約0.05mm的限制帶,,鉆桿連在一塑料管上即成。

垂體吸取裝置:由玻璃吸頭,、抽濾瓶,、真空泵及連接三者的橡皮管組成

 

三、手術(shù)準(zhǔn)備

大鼠沿頸部正中自下頜部乳頭突起向下剪開(kāi)長(zhǎng)1.5~2.5cm皮膚,,沿肌纖維走向鈍性分離皮下組織,、唾液腺,暴露氣管,。距氣管中線(xiàn)左側(cè)或右側(cè),,打開(kāi)頸前筋膜,將唾液腺左右葉拉向兩側(cè),。用注射器針頭在3-4氣管軟骨環(huán)間刺入,,針頭抽出后,沿針頭刺入軌跡插入PE50或PE90管,。在動(dòng)物氣管旁用兩個(gè)彎鑷交替鈍性分離胸骨舌骨肌和甲狀舌骨肌肌間組織至顱底,。注意避免損傷血管及神經(jīng)。

手術(shù)拉鉤于組織分離區(qū)域?qū)⒓∪饨M織和氣管向兩側(cè)拉開(kāi)充分暴露顱底,。用牙科改制刮刀刮除顱底骨膜及表面附著的組織,,暴露蝶枕水平骨縫隙。用電鉆在顱底部*鉆孔進(jìn)入顱內(nèi),。垂體就位于鉆孔的的下方,。置牙科探針進(jìn)入鉆孔,探針尖端緊貼顱內(nèi)壁剝離垂體表面被膜組織后,,移除探針,。

用負(fù)壓吸管連接320-500mmHg負(fù)壓泵吸出垂體。用棉簽及紗布術(shù)區(qū)止血后,,卸除外科拉鉤,。動(dòng)物恢復(fù)呼吸后,移除氣管插管。復(fù)位胸骨舌骨肌充分覆蓋氣管切開(kāi)孔,,縫合皮膚切口,。

術(shù)后護(hù)理術(shù)后蘇醒前應(yīng)注意大鼠口腔或氣管中的分泌物以防窒息。醒后給清潔飲水,,手術(shù)中失血多者考慮皮下注射1015ml林格氏液,,或以葡萄糖生理鹽水做飲水。因去垂體大鼠的能量代謝水平降低,,故注意保溫,。

 

四、注意事項(xiàng)

麻醉:根據(jù)手術(shù)所需時(shí)間確定麻醉藥劑量,,麻醉不宜過(guò)深,以免抑制呼吸和循環(huán),,以手術(shù)一完畢,,動(dòng)物即能活動(dòng)為宜。這樣術(shù)后動(dòng)物能盡快飲水進(jìn)食,,有利于體質(zhì)恢復(fù),。

鉆孔:孔位置應(yīng)在正中。從氣管左側(cè)行鉆,,鉆孔易偏向右側(cè),;反之亦然,致使對(duì)側(cè)垂體不易吸出,。鉆孔時(shí),,需耐心用針測(cè)試所鉆骨層厚度,逐步增加鉆頭深度,,直至薄薄一層,,燈下可見(jiàn)透亮。然后向外挑出薄層骨,,不讓骨片落入腦室內(nèi),,這是手術(shù)成敗的關(guān)鍵所在。

吸取力量:吸頭的真空抽吸力量應(yīng)適度,,以能輕輕吸起掌肌為宜,,以免吸力過(guò)大,損傷腦實(shí)質(zhì),,可通過(guò)連在橡皮管上的調(diào)節(jié)夾來(lái)調(diào)節(jié)吸力,。

鉆孔封堵:因術(shù)后孔周組織能將鉆孔封住,故薄骨片挑出后,,鉆孔可不作處理,,也不必將骨片放回,不影響模型的成功,。

口腔清潔:術(shù)中注意防止窒息,,隨時(shí)將氣管或口腔內(nèi)的分泌物吸除,。

 

五、模型評(píng)價(jià)

術(shù)后檢測(cè): 

1,、解剖動(dòng)物,,證實(shí)垂體全部切除。沒(méi)有造成不必要副損傷(神經(jīng),,血管,,下丘腦,咽后壁),;模型動(dòng)物的體重增量相對(duì)正常動(dòng)物顯著減少

2,、血清學(xué)檢測(cè)建立標(biāo)準(zhǔn)。垂體前葉激素有6種,,可選擇促腎上腺皮質(zhì)激素,,促甲狀腺素,促卵泡激素,,促黃體生成激素血液卵泡刺激素(FSH)和促甲狀腺激素(TSH),;垂體后葉激素有2種,可選擇抗利尿激素和縮宮素,;腦垂體切除模型各激素水平相對(duì)于正常動(dòng)物低下,。

3、骨密度(BMD)檢測(cè):造模前后大鼠麻醉后平躺于X線(xiàn)骨密度儀下,,以小動(dòng)物專(zhuān)用軟件模塊測(cè)定大鼠全身骨密度和骨礦含量,。計(jì)算骨組織總面積(T.Ar)和骨小梁面積(Tb.Ar)、骨小梁周長(zhǎng)(Tb.Pm),、骨小梁厚度(Tb.Th)降低,,骨小梁分離度(Tb.Sp)。

Tb.Th可解釋骨量變化,,在骨小梁一定的情況下,,厚度越大,骨量越多,,當(dāng)Tb.Th值減小以及Th.Sp值增大,,即骨小梁之間距離加大,表明骨結(jié)構(gòu)不好,,骨吸收增加,,可能發(fā)生骨質(zhì)疏松。