弄個(gè)明白！病理組織學(xué)這些經(jīng)典知識(shí),，一起來看看
國(guó)際著名病理學(xué)家Karl Lennert曾經(jīng)說過：“技術(shù)是病理學(xué)之母”,。病理組織學(xué)屬于形態(tài)學(xué)檢驗(yàn),，組織病理學(xué)是將病變組織制成厚約數(shù)微米的切片，經(jīng)不同方法染色后用顯微鏡觀察其細(xì)微病變，對(duì)疾病做出病理學(xué)診斷,。組織病理分析是檢驗(yàn)大多數(shù)動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)成功與否的金標(biāo)準(zhǔn)。病理學(xué)基本檢驗(yàn)技術(shù)包括組織固定,、石蠟制片,、蘇木素-伊紅染色及常用特殊染色技術(shù)。
“操千曲而后曉聲,，觀千劍而后識(shí)器”,，閱讀下文自測(cè)病理組織學(xué)知識(shí)你知多少~
拓普生物
一、石蠟切片與冰凍切片
（一）石蠟切片制備流程
1 | 取材,、固定 |
2 | 洗滌,、脫水、透明,、浸蠟,、包埋 |
3 | 切片、撈片,、晾片 |
4 | 染色,、封片 |
（二）冰凍切片制備流程
1 | 取材、固定 |
2 | OCT包埋 |
3 | 液氮速凍 |
4 | 切片,、染色 |
TIPS：石蠟切片和冰凍切片如何選擇?
1,、冰凍切片優(yōu)點(diǎn)制片時(shí)間短，時(shí)間快,；缺點(diǎn)保存時(shí)間短,；
2、石蠟切片對(duì)組織的形態(tài)保存比冰凍切片好,標(biāo)本可以長(zhǎng)期保存,；
3,、常規(guī)染色，組化優(yōu)先推薦做石蠟切片,；
4、免疫熒光推薦用冰凍切片 (石蠟有自發(fā)熒光),；
5,、脂質(zhì)染色、ROS染色,、 ATP染色,，膽固醇染色推薦做冰凍切片。
二,、HE染色
蘇木精 — 伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ,，簡(jiǎn)稱HE染色法 ，石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一 。HE染色法是組織學(xué),、胚胎學(xué),、病理學(xué)教學(xué)與科研中最基本、使用最廣泛的技術(shù)方法,。
圖注：拓普生物HE染色圖
1 | 組織固定 |
2 | 包埋 |
3 | 脫蠟 |
4 | 蘇木素染色 |
5 | 伊紅染色 |
6 | 脫水 |
7 | 封片 |
8 | 觀察拍片 |
9 | 結(jié)果整理 |
圖注：HE染色實(shí)驗(yàn)流程圖
HE染色過程可能出現(xiàn)問題：
1,、HE染色最常見的紅藍(lán)失調(diào)
偏藍(lán)色：蘇木素染色過深，分化不夠,；伊紅試劑過期,；伊紅染色時(shí)間太短，分化過度,。
偏紅色：蘇木素染色過淺,，分化過度；組織固定不佳,，細(xì)胞核不著色,；脫蠟不徹底，蘇木素染不上,；蘇木素氧化成熟不夠,；伊紅染色過深，分化不足,。
2,、HE染色后出現(xiàn)的大白色斑塊或斑點(diǎn)
答：脫蠟前烤片溫度偏低，時(shí)間過短,，蠟未完全融化,；切片在脫蠟溶劑中停留時(shí)間過短；脫蠟溶劑使用太久,，得更新,。
3、細(xì)胞核染色過淺,，顏色暗淡
答：切片在蘇木素染液中停留過短,，或蘇木素過度氧化失效，或分化時(shí)間太長(zhǎng),。對(duì)策：重新染色,。將組織切片放入0.01%氫氧化鈉、0.5%氨水,、飽和的碳酸氫鈉溶液,、乙醇溶液，每個(gè)3-5min即可,，接著重新染色,?？梢赃m當(dāng)?shù)亟M織的嗜堿性以增強(qiáng)核染色，如Zenker液固定的切片可放入5%碳酸氫鈉溶液中3h,，自來水沖洗5-10min染色,，或Bouin液固定的切片可放入5%碳酸氫鈉溶液中1h，自來水沖洗10min染色,。
4,、細(xì)胞核染色過深，胞漿著藍(lán)色
答：切片在蘇木素染液中停留過長(zhǎng),；或切片太厚,；或分化時(shí)間太短。這種情況首先鏡下看看切片厚度(最佳厚度1-2層細(xì)胞核),，要么重新染色,，要么重新制片。
5,、細(xì)胞核呈棕紅色改變
答：蘇木素染液過度氧化,；或蘇木素染色后反藍(lán)不足導(dǎo)致。應(yīng)該立即更換蘇木素染色液,?；蛟诹鲃?dòng)自來水(一般自來水PH7.5-7.8)，或在稀釋的氨水溶液,，或在0.2%碳酸氫鈉中適當(dāng)浸泡,，這些步驟均可一定程度地加強(qiáng)蘇木素染色后的反藍(lán)效果。
6,、伊紅染色較淡
答：伊紅的PH改變了(PH可能已大于5),；或反藍(lán)液體未漂洗干凈，殘留后影響胞漿嗜酸性染色,；或者切片太薄并且在隨后的脫水步驟停留過久,。對(duì)策：檢查伊紅染色液PH，可采用乙酸調(diào)至4.6-5.0,。根據(jù)以上提示,，調(diào)整實(shí)驗(yàn)步驟。
拓普生物
三,、免疫組化
免疫組化是應(yīng)用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理,，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶,、金屬離子,、同位素）顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)）,，對(duì)其進(jìn)行定位,、定性及相對(duì)定量的研究,，稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)。
圖注：拓普生物免疫組化圖
1 | 組織固定 |
2 | 包埋 |
3 | 脫蠟 |
4 | 抗原修復(fù) |
5 | 封閉 |
6 | 一抗孵育 |
7 | 二抗孵育 |
8 | DAB顯色 |
9 | 蘇木素復(fù)染 |
10 | 觀察拍照 |
11 | 封片 |
12 | 脫水透明 |
圖注：免疫組化實(shí)驗(yàn)流程圖
圖注：拓普生物其他染色圖
四,、各類組織常見染色方法及指標(biāo)
組織類型 | 實(shí)驗(yàn)方法 | 具體檢測(cè)項(xiàng)目名稱 |
腦 | 常做特殊染色 常做組化熒光指標(biāo)
| TTC（腦梗）,，尼氏染色，甘安銀染色,，LFB染色,，高爾基染色，剛果紅染色,，F(xiàn)JB染色 |
心臟 | 常做特殊染色 常做組化熒光指標(biāo)
| TTC（心梗）,，mason（心梗），天狼猩紅（心梗）,冰切油紅（動(dòng)脈粥樣硬化,，主動(dòng)脈瓣） |
主動(dòng)脈
| 常做特殊染色
常做組化熒光指標(biāo) | EVG,大體油紅,，冰切油紅，movant五色法
a-SMA,，VWF,VIII,VEGF |
肝
| 常做特殊染色 常做組化熒光指標(biāo) | PAS染色,，冰切油紅，mason,，天狼猩紅
炎癥：CD3,CD4,CD8,CD68,F4/80,MPO,Ly6G,，CD11c，CD11b,，IL2,IL4,IL6,IL8,IL10,TGFb,，Tonfa；纖維化：Tonfa-SMA,，F(xiàn)N,LN
|
腎
| 常做特殊染色 常做組化熒光指標(biāo)
| PAS染色,，PASM染色,mason，天狼猩紅
纖維化：Tonfa-SMA,，F(xiàn)N,LN
|
肺
| 常做特殊染色 常做組化熒光指標(biāo)
| HE染色,，PAS染色，mason,，天狼猩紅,Wiegert間苯二酚堿性品紅染色
炎癥：CD3,CD4,CD8,CD68,F4/80,MPO,Ly6G,，CD11c，CD11b,，IL2,IL4,IL6,IL8,IL10,TGFb,，Tonfa；纖維化：Tonfa-SMA,，F(xiàn)N,LN
|
胃
| 常做特殊染色 常做組化熒光指標(biāo)
| HE染色,，PAS染色，阿利新藍(lán)染色,，AB-PAS染色,，肥大細(xì)胞染色
c-kit,，GLP-1，ZO-1,，claudin,，occluding
|
腸
| 常做特殊染色常做組化熒光指標(biāo) | HE染色，PAS染色,，阿利新藍(lán)染色,，AB-PAS染色，肥大細(xì)胞染色 c-kit,，GLP-1,，ZO-1，claudin,，occluding |
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