圍產(chǎn)期窒息所致缺氧缺血性腦病(HIE)為新生兒期危害最大的常見病之一,常引起新生兒死亡和后期的神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育障礙,現(xiàn)階段對(duì)缺氧缺血性腦損傷尚無根本性的防治措施,。

HIBD的發(fā)病原因及發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜,；為了對(duì)該領(lǐng)域進(jìn)一步深入研究,模擬新生兒分娩前后窒息的經(jīng)過，建立缺氧缺血性腦損傷（HIBD）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型來進(jìn)行相關(guān)研究已被許多人采用,。

缺氧缺血性腦損傷建模方法為：

1. 缺血部分：將新生鼠頸部常規(guī)消毒,，頸正中作一切口。對(duì)HIBD組,，切開皮膚后用血管鉗分離頸總動(dòng)脈后用無創(chuàng)縫合線雙重結(jié)扎橫斷左頸總動(dòng)脈,，檢查斷流成功后縫合切口；

2. 缺氧部分：放入37℃恒溫的密閉缺氧箱內(nèi),，向缺氧箱內(nèi)通含 8%氧氣和 92%氮?dú)獾幕旌蠚怏w（氣流量 0.5L/ min,，溫度為 37℃，濕度為 70% ±5%）,，缺氧1小時(shí),；缺氧后回籠；

3. 缺氧后回母鼠身邊繼續(xù)哺乳喂養(yǎng)或安排人工喂養(yǎng)存活,。

模型驗(yàn)證：

1. 傳統(tǒng)方法：劃分時(shí)間點(diǎn)取材進(jìn)行TTC染色,， HIBD損傷后 72 小時(shí)的梗塞區(qū)域范圍；

圖1 TTC 染色^[1]

2. 行為學(xué)檢測：

如水迷宮：通過記錄測試小鼠在每個(gè)象限中花費(fèi)的時(shí)間,、在訓(xùn)練的平臺(tái)位置上的經(jīng)過次數(shù)和在未訓(xùn)練的象限中的類似位置所花費(fèi)的時(shí)間進(jìn)行比較來評(píng)估探索試驗(yàn)中測試小鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力,；

圖2 水迷宮檢測^[2]

礦場實(shí)驗(yàn)-利用小鼠的天性，對(duì)其緊張度和探索性行為進(jìn)行判斷,，系統(tǒng)評(píng)估小鼠的探索能力,、基本運(yùn)動(dòng)能力以及焦慮行為,。如果小鼠更傾向于在曠場試驗(yàn)箱中間運(yùn)動(dòng)，解讀為抗焦慮行為,，反之則為焦慮行為,。

3. 病理染色

可選擇HE染色：

造模后24 h，新生大鼠損傷側(cè)海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化 HE染色,，假手術(shù)組神經(jīng)細(xì)胞排列整齊,，形態(tài)規(guī)則；HIBD組神經(jīng)細(xì)胞排列疏松紊亂,。

圖3 HE染色^[3]

可選擇尼氏染色：正常動(dòng)物尼氏小體排列整齊,，數(shù)量多，無空隙為完好,；HIBD模型動(dòng)物尼氏小體數(shù)量少,，且稀松不整齊，空隙很大為損傷,。

腦癱不及時(shí)的治療,，其行為將會(huì)受到阻礙，大量實(shí)驗(yàn)和臨床資料表明,，腦的邊緣訓(xùn)練特別是海馬區(qū)受損的時(shí)候,，可引起患兒的情緒異常，患兒常表現(xiàn)為好哭,，任性,，固執(zhí)，偏執(zhí),，脾氣古怪，情感脆弱,，易于激動(dòng),，有的情感不穩(wěn)定等手足蠕動(dòng)的患者較為多些。

而轉(zhuǎn)化為動(dòng)物實(shí)驗(yàn),，建立HIBD模型,、應(yīng)用一側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)合缺氧的方法制作新生乳鼠缺血缺氧腦損傷動(dòng)物模型，觀察其行為學(xué),、學(xué)習(xí)記憶功能及腦組織病理變化,，探討新生乳鼠缺血模型的評(píng)價(jià)方法。亦可在該模型基礎(chǔ)上建立基因組測序,、藥物治療,、干細(xì)胞治療研究、益生菌及腸道菌群治療研究等,。

圖片來源：

[1] Zeng W, Wang Y, Xi Y, Wei G, Ju R. Bone marrow mesenchymal stem cells overexpressing hepatocyte growth factor ameliorate hypoxic-ischemic brain damage in neonatal rats. Transl Neurosci. 2021 Dec 17;12(1):561-572. doi: 10.1515/tnsci-2020-0204. PMID: 35003786; PMCID: PMC8684041.

[2] He X, Zhang T, Zeng Y, Pei P, Liu Y, Jia W, Zhao H, Bi M, Wang S. Sodium butyrate mediates histone crotonylation and alleviated neonatal rats hypoxic-ischemic brain injury through gut-brain axis. Front Microbiol. 2022 Oct 20;13:993146. doi: 10.3389/fmicb.2022.993146. PMID: 36338029; PMCID: PMC9631217.

[3] Zhang XY, Liu CM, Ma YH, Meng N, Jiang JY, Yu XH, Wang XL. TXNIP/Trx-1/GPX4通路促進(jìn)新生大鼠缺氧缺血后海馬神經(jīng)元鐵死亡的作用機(jī)制 [The TXNIP/Trx-1/GPX4 pathway promotes ferroptosis in hippocampal neurons after hypoxia-ischemia in neonatal rats]. Zhongguo Dang Dai Er Ke Za Zhi. 2022 Sept 15;24(9):1053-1060. Chinese. doi: 10.7499/j.issn.1008-8830.2205149. PMID: 36111726; PMCID: PMC9495243.