肝臟解剖結(jié)構(gòu)
(1)肝分五葉,,左外葉、左中葉,、中葉,、右葉和尾狀葉(右葉和尾狀葉都是由兩葉組成);
(2)肝漿膜:肝漿膜下注射對肝實(shí)質(zhì)無損傷,,可用于藥物或細(xì)胞注射且可使其直接接觸肝實(shí)質(zhì),;
(3)隔肝系膜:維系膈肌與肝左葉,、中葉前面以及膽囊。各個肝葉間也有多個系膜維系,;
(4)肝動脈和門靜脈,;肝動脈:發(fā)自腹主動脈干,運(yùn)送氧氣入肝臟,;門靜脈:匯集腸胃,、胰腺、脾臟的靜脈血送入肝臟(用于靜脈注射,、采血和插管,。門靜脈不可堵塞、不可結(jié)扎),;肝靜脈:血液流出肝臟的血管,,匯入后腔靜脈。
(5)膽囊和膽總管,;膽囊:夾在肝左葉和肝中葉之間,,膽囊的血管匯入門靜脈;膽總管:各個肝葉的膽管及胰管共同匯入膽總管,,最后進(jìn)入十二指腸壺腹部,。(壺腹部為膽總管在十二指腸內(nèi)的開口部位,次開口常用于膽總管逆向插管和注射,。)
大小鼠肝缺血再灌注損傷模型
1)模型背景:
對于肝臟疾病晚期患者通常采用手術(shù)對其進(jìn)行治療,,但在肝臟移植或者切除的過程中,為防止患者大出血,,會進(jìn)行缺血處理,,而肝缺血再灌注損傷也是目前肝臟手術(shù)或者移植過程中一個重要問題。因此建立一種穩(wěn)定,,簡單經(jīng)濟(jì)的全肝缺血再灌注模型,,對于研究其發(fā)生機(jī)制,預(yù)防及治療具有重要意義,。
缺血再灌注損傷,,即缺血器官、組織重新獲得血液供應(yīng),,不僅不能使組織,、器官功能恢復(fù),反而加重了功能代謝障礙及結(jié)構(gòu)破壞,。對麻醉動物的肝中葉和肝左葉的門靜脈和肝動脈進(jìn)行阻斷和再通,,由于肝臟中葉和左葉血流的阻斷和再通,引起肝臟中葉和左葉明顯的再灌注損傷。肝臟缺血過程中由于肝細(xì)胞內(nèi)ATP迅速耗盡,,導(dǎo)致乳酸酮體等的堆積,,及線粒體氧化磷酸化功能低下,引發(fā)代謝性酸中毒,,缺血過程中細(xì)胞缺氧使ATP含量下降,,導(dǎo)致肝細(xì)胞內(nèi)外Ca2 +重新分布,即Ca2 +內(nèi)流,,引起線粒體的損傷,。再灌注過程中由于氧自由基的爆發(fā)性增多,中性粒細(xì)胞的聚集,,kupffer細(xì)胞的激活,,細(xì)胞凋亡及其他多種細(xì)胞因子的作用,使得肝細(xì)胞膜損傷,,內(nèi)皮細(xì)胞損傷及肝臟微循環(huán)障礙等導(dǎo)致肝臟功能代謝障礙及結(jié)構(gòu)破壞,。
2)器械與耗材:
剪刀、鑷子,、無創(chuàng)血管夾,、4-0縫合線、紗布,、生理鹽水,、碘伏、棉簽,、計(jì)時器
3)操作方法:
1. 麻醉大鼠(小鼠),,仰臥位擺放實(shí)驗(yàn)動物,沿腹中線中上部剪一小口(開口大小據(jù)實(shí)驗(yàn)動物大小及操作手法而定,,原則上越小越好),,用棉簽輕輕翻動肝葉,分離出肝臟左葉與中葉,,暴露肝蒂,,分離肝門靜脈。
2. 將肝左葉與中葉的肝門靜脈和肝動脈用無創(chuàng)血管夾夾閉,,可使約70%的肝臟缺血,,30s后與非阻斷的右葉相比,肉眼可見阻斷葉明顯變白,,說明阻斷成功,。
3. 使用棉簽將肝臟送回后,,用止血夾暫時夾閉開口,,生理鹽水浸潤后的紗布覆蓋傷口處。
4. 動物放于保溫墊上,麻醉完成持續(xù)缺血30min~90min后,,重新打開腹腔,,迅速取出血管夾,恢復(fù)缺血肝血流,,30s左右可見缺血區(qū)肝臟由白色逐漸恢復(fù)為鮮紅色表明再灌注成功,,逐層縫合腹腔肌肉和皮膚關(guān)閉腹腔,完成手術(shù),。
技術(shù)討論
(1)分離肝門時用棉簽進(jìn)行分離,,可避免對肝臟的損傷;
(2)阻斷血流要一次成功,,否則會造成缺血預(yù)處理,,減輕損傷程度;
(3)術(shù)前禁食有利于手術(shù)進(jìn)行,;
(4)取材時鑷子不要損傷到肝臟,。