• 動(dòng)物選擇：8 周齡雄性 C57BL/6 小鼠（體重 20-25g，免疫背景穩(wěn)定）,；

• 分組設(shè)計(jì)：正常組,、氣道口滴注組、氣管插管組,，對(duì)比不同給藥方式的成模效率,。

• 氣道口滴注：暴露聲門后緩慢滴注 50μL BLM 溶液，需精準(zhǔn)控制避免誤吸,；

氣道口滴注操作示意圖-a

手指捏住舌頭,，伸入壓舌燈，觀察聲門開合的位置

氣道口滴注操作示意圖-b

向聲門緩慢滴加50ul藥物

• 氣管插管：借助留置針經(jīng)口腔插入氣管,，利用小鼠自主呼吸吸入藥物,，確保肺部均勻給藥。

氣管滴注操作示意圖

留置針針頭緊貼舌根部中央緩慢進(jìn)針,， 趁聲門打開的間隙進(jìn)入氣管,， 利用小鼠自主呼吸過2-3個(gè)呼吸周期吸入BLM。

• 觀察指標(biāo)：對(duì)小鼠體重變化,、肺泡上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu),、肺成纖維細(xì)胞分布、膠原蛋白和炎性組織水平進(jìn)行觀測(cè)，這些指標(biāo)從整體體征,、細(xì)胞層面,、組織成分等方面綜合反映肺纖維化進(jìn)程，涵蓋了疾病發(fā)展過程中可能出現(xiàn)變化的關(guān)鍵方面,，為全面評(píng)估模型提供依據(jù),。

• 評(píng)價(jià)方法：

• Micro CT 影像檢測(cè)：通過對(duì)不同時(shí)間點(diǎn)（如 14 天、21 天,、28 天）模型組與生理鹽水組小鼠肺部的檢測(cè),，以低通氣組織變化為量化指標(biāo)（模型組 14 天和 21 天時(shí)低通氣組織顯著增加，p<0.05 ,，28 天不再明顯）,，從影像學(xué)角度直觀呈現(xiàn)肺部結(jié)構(gòu)和通氣功能改變，幫助判斷肺纖維化程度,。

  

  Pivotal role of micro-CT technology in setting up an optimized lung fibrosis mouse model for drug screening - PMC  

  不同時(shí)間點(diǎn) BLM 和生理鹽水處理動(dòng)物的代表性冠狀顯微 CT 肺切片和相應(yīng)的 3D 渲染 [3]

• HE,、Masson 染色：利用這兩種染色方法，在病理層面觀察肺組織形態(tài)學(xué)變化,。如 Masson 染色結(jié)果顯示,，給藥后第 7 天肺組織呈重度肺泡炎改變（大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)） ，第 14 天纖維化開始形成（炎性細(xì)胞減少,、成纖維細(xì)胞增多）,，第 21 天出現(xiàn)彌漫性肺間質(zhì)纖維化，清晰展現(xiàn)疾病不同階段特征,。

  

  正常組與氣道口滴注組（Day7,、Day14、Day21）masson染色結(jié)果

  

  氣管插管組與氣道口滴注組masson染色結(jié)果

• 生化檢測(cè) α-SMA 等成纖維因子：α-SMA 是肌成纖維細(xì)胞的標(biāo)志性蛋白,，檢測(cè)其水平可反映成纖維細(xì)胞的活化程度,，從生化角度為肺纖維化進(jìn)程提供量化數(shù)據(jù)支持，進(jìn)一步明確疾病發(fā)展情況,。

1. 模型升級(jí)：目前小鼠模型多為急性損傷,，未來(lái)將聚焦人源化、慢性持久性模型,，更貼近人類特發(fā)性肺纖維化的病程,；

2. 精準(zhǔn)醫(yī)療：結(jié)合基因檢測(cè)與生物信息學(xué)，探索抗纖維化藥物與免疫調(diào)節(jié)（如 IL-17 抑制劑）,、抗氧化劑（如 NAC）的聯(lián)合治療方案,；

3. 多學(xué)科融合：通過基因編輯、生物工程技術(shù),，推動(dòng)臨床前模型與臨床數(shù)據(jù)聯(lián)動(dòng),，加速新藥研發(fā)進(jìn)程,。