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蛛網(wǎng)膜下腔出血模型

欄目:蛛網(wǎng)膜下腔出血模型 發(fā)布時(shí)間:2024-07-08
蛛網(wǎng)膜下腔出血模型

動(dòng)物品種

SD大鼠

動(dòng)物性別

雄性

動(dòng)物周齡

250-300g

造模方法

1.  麻醉,、消毒、固定,。

2.  用肝素預(yù)潤(rùn)過的針簡(jiǎn)抽取0.2 ml血液,。

3.  將大鼠頭部固定在立體定位注射儀上,在頭皮的中線上做一個(gè)2cm矢狀切口,。

4.  在前鹵0.1mm,、右4 mm處做好鉆孔記號(hào),,確??锥丛诠跔羁p,。

5.  用鉆頭在標(biāo)記處垂直鉆孔,,注意不要損傷硬膜。把 0.2 ml未肝素化的血液裝入針簡(jiǎn),,并把針的斜面放置于中線相反的方向,針尖插入腦組織直至針尖消失,。

6.  針垂直插入右側(cè)尾狀核 5.5 mm。把 100自體全血以10 l/min 的速度灌入右側(cè)基底節(jié)區(qū),結(jié)束后針頭繼續(xù)留置2 min,。

7.  緩慢退針,,填抹骨蠟并縫合皮膚。

成模鑒定

1.  實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般情況觀察

2.  放置測(cè)試

3.  轉(zhuǎn)角試驗(yàn)

4.  腦水容量:腦水腫和腦出血的患者生存率有很大關(guān)系,故需要檢測(cè)腦水腫的形成。腦水腫主要采用干濕重法檢測(cè),。

5.  血腦屏障通透性:常用檢測(cè)方法是熒光同位素和伊文思藍(lán)(Evans blue)染色DAB染色法做 IgG染色也可以檢測(cè)血腦屏障的通透性,。

6.  腦基因組學(xué):確定基因表達(dá)的變化。

7.  組織學(xué):評(píng)估出血量,、出血位置和范圍神經(jīng)細(xì)胞死亡情況和腦萎縮情況

造模周期

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后續(xù)檢測(cè)指標(biāo)建議

1.  腦水容量:腦水腫和腦出血的患者生存率有很大關(guān)系,故需要檢測(cè)腦水腫的形成,。腦水腫主要采用干濕重法檢測(cè)。

2.  血腦屏障通透性:常用檢測(cè)方法是熒光同位素和伊文思藍(lán)(Evans blue)染色DAB染色法做 IgG染色也可以檢測(cè)血腦屏障的通透性,。

3.  腦基因組學(xué):確定基因表達(dá)的變化,。

4.  組織學(xué):評(píng)估出血量、出血位置和范圍神經(jīng)細(xì)胞死亡情況和腦萎縮情況

5.  腦組織HE染色

注意事項(xiàng)

1.  造模后大鼠予以單籠喂養(yǎng),,注意保溫,、保暖.若造模中或造模后大鼠死亡導(dǎo)致無法收集到該組實(shí)驗(yàn)所需的數(shù)據(jù)時(shí),按照相同的隨機(jī)原則選用備用的大鼠替代,。整個(gè)實(shí)驗(yàn)選用大鼠共57只,,其中死亡12只,納入實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)大鼠45只,。

2.  標(biāo)本的獲?。好拷M在預(yù)定的時(shí)間點(diǎn)((1天、3天,、5天),,大鼠麻醉成功后,仰臥位,,沿腹部中線,,組織剪依次剪開皮膚,鈍行分離皮下組織,,剪開腹部肌肉、腹膜,,鈍性分離下腔靜脈,,用一次性靜脈采血針抽取3m1靜脈血,室溫放置2小時(shí),,置于離心機(jī)中,,2-8攝氏度, 1000r/min,、離心15分鐘,,取上層血清分裝于防凍管中,置于一20°C的冰箱中保存,,待檢測(cè),。

3.  腦組織取材:采血后立即用止血鉗夾閉下腔靜脈及腹主動(dòng)脈,繼續(xù)沿腹中線向上剪至劍突,剪開隔肌,,沿胸骨旁開2cm分別剪開兩側(cè)肋骨,,組織鉗提取胸骨向上固定,充分暴露心臟,,用連接輸液器的注射針插入左心室尖部,,快速滴注生理鹽水,同時(shí)眼科剪剪開右心耳,,持續(xù)灌注,,先快后滿,至大鼠眼球變白,、上爪變白,、右心耳灌注也變清亮?xí)r停止灌注。迅速斷頭取腦,,完整剝離腦組織,,放入4%的多聚甲醛中浸泡48小時(shí)作病理檢測(cè)。

4.  溫度的影響:在缺血性腦損傷中,,溫度的微小下降也會(huì)具有腦保護(hù)作用,。這種情況同樣適用于腦出血模型。腦出血后自身體溫調(diào)節(jié)受到影響,,實(shí)驗(yàn)后期動(dòng)物體溫會(huì)急劇下降,,這種溫度上的變化會(huì)影響腦出血模型的結(jié)果。因此,,顱骨溫控和肛門溫控是必要的,,而且要在術(shù)后48h將動(dòng)物飼養(yǎng)于溫控保溫箱內(nèi)。

5.  性別的影響:在缺血性卒中模型中,,雌性動(dòng)物的行為分?jǐn)?shù)以及腦梗死體積,相比雄性動(dòng)物均大幅減少,。在腦出血模型中,雌性動(dòng)物相對(duì)于雄性行為學(xué)上恢復(fù)期短,,腦血腫較小,。在兩種模型中,雌性的神經(jīng)保護(hù)作用可能是循環(huán)中的雌性激索和黃體酮,,因此實(shí)驗(yàn)中常選擇雄性動(dòng)物,。

6.  手術(shù)過程中的出血問題:在手術(shù)過程中若遇到出血問題,可以用止血綿和骨蠟止血

7.  注射速度的快慢:與之前模型中快速注射相反的是,該模型使用了慢性注射法,,將血液注入腦部軟組織,。這種慢性注射限制了血液外滲進(jìn)入蛛網(wǎng)膜下腔,從而逼真地模仿了自然的過程;此外,,避免了對(duì)毗鄰組織產(chǎn)生生理性的壓力傷害

8.  使用自體還是供體的血液:腦水腫是腦出血研究的重點(diǎn),,腦部軟組織血腫會(huì)引發(fā)腦屏障破壞和水腫,。在自體注血1~3d后,C57BL/6 小鼠的同側(cè)基礎(chǔ)神經(jīng)節(jié)和皮質(zhì)的腦部含水量顯著提高,。有趣的是,,有研究顯示,在腦部注血 1d 后,與自體血液相比,,供體血液導(dǎo)致了更嚴(yán)重的腦部水腫,。因此,可以利用供體血液模型進(jìn)行腦水腫的進(jìn)一步研究,。