動物性別

雌雄

動物周齡

一般為成年動物

造模方法

A.  液氮凍傷皮膚動物模型

（1）  動物適應性飼養(yǎng)7天，將動物隨機分為對照組,、模型組（每組中雌雄數量一致）,。對所有動物背部或耳部區(qū)域剃毛處理,，剃毛區(qū)域為直徑 2～4 cm的圓形,。將銀元或鐵棒等浸入液氮罐中15 min左右,，使其充分冷卻至-196℃，取出之后立即將其貼緊大鼠（小鼠,、家兔）皮膚造模部位一定時間（具體時間根據實驗目的確定）,，可選擇不同時間（常規(guī)參見凍傷時間）造不同程度的凍傷模型，如輕度凍傷(Ⅰ度和Ⅱ度凍傷又稱為淺層凍傷),、重度凍傷(Ⅲ度和Ⅳ度凍傷又稱為深層凍傷),。

a.  凍傷時間：家兔模型：貼皮膚時間3～8 s(輕度)、 (10～15 s)重度,。大鼠模型：貼皮膚時間3～5 s(輕度),、 5～15 s(重度)。小鼠：2～4 s(輕度)、 5～8 s(重度),。

b.  凍傷面積：不同動物凍傷面積，小鼠以直徑10 mm左右為宜,，大鼠以直徑20 mm左右為宜,，家兔以直徑40 mm為宜。皮膚局部凍傷后,，制備模型成功,。

注意事項：應控制好冷凍時間、凍傷面積及程度和冷凍源,，減少個體差異,。輕度凍傷于凍傷后第5～6 天自愈，重度凍傷至少能夠維持10 d,。

B.  直接凍傷脛前肌制備大鼠凍傷模型

模型建立：動物適應性飼養(yǎng)7天,，將動物隨機分為對照組、模型組（每組中雌雄數量一致）,。將大鼠麻醉之后在無菌條件下分別游離雙側脛前肌 (保留起止點),，術中盡量不要損傷肌膜。用接觸面積約1. 0 cm × 1. 8 cm的矩形金屬條(厚2. 5 cm)經液氮冷凍后,，直接放壓在脛前肌表面90 s,，凍后接觸部位的肌組織蒼白變硬， 約5 ～ 6 min逐漸由白轉為暗紅色,，用無菌沖洗液沖洗,，直接縫合皮膚，制備脛前肌深度凍傷模型,。

注意事項：減少凍傷局部深度等的差異,，防止造模過程的感染

C.  低溫乙醇浸泡法制備凍傷模型

模型建立：動物適應性飼養(yǎng)7天，將動物隨機分為對照組,、模型組（每組中雌雄數量一致）,。將模型組家兔(大鼠、小鼠,、猴)足脫毛,，暴露表皮，用無刺激軟頭記號筆在動物足體外側緣骨凸起處上涂記號線,，作為浸凍線,。將足浸入低溫90%乙醇或低溫95% 乙醇中，可根據不同動物,，選擇不同的造模方法,。

a.  小鼠模型:于-20 ℃ ，95%乙醇中浸泡，輕度凍傷1min左右,，重度凍傷3 min左右,。

b.  大鼠模型:于-25 ℃ ， 90%乙醇中浸泡,，輕度凍傷1～5 min,，重度凍傷時間7～ 10 min。

c.  兔模型：Ⅰ～Ⅲ度凍傷浸泡(-10 ℃ ,， 95%乙醇)時間分別為 8,， 10， 15 min,，Ⅳ 度凍傷在-20 ℃ 中浸凍,，當足組織溫度降至-5 ℃ (自浸凍線中點上方插入針狀熱電偶感應)時再繼續(xù)浸凍10 min；浸凍后在25℃室溫下自然復溫,，用無菌紗布包扎,。冷凍后即制備成凍傷模型。

D.  模擬高原低氧復合冷凍法制備大鼠凍傷模型（有條件可做）

模型建立：動物適應性飼養(yǎng)7天,，將動物隨機分為對照組,、模型組（每組中雌雄數量一致）。將模型組大鼠置于大型復合低壓艙內以進行缺氧習服訓 練,，上,、下午各 30 min。模擬低壓缺氧環(huán)境設備由小型真空 干燥箱改造而成,。習服訓練時,，調節(jié)進氣閥使艙內壓恒定于47. 2 kPa，模擬海拔6 000 m高度,，設定溫度(25 ± 1)℃ ,，相對 濕度 40% 。習服1周后,，將大鼠麻醉后,，背部脫毛露出皮膚， 形成直徑(30 ± 2) mm 的圓形裸露皮膚,，將液氮滲透器底部圓形鋁合金接頭與大鼠背部脫毛部位皮膚緊密貼合,，進行液 氮滲透冷凍，溫度-196 ℃ ,，冷凍時間10 s,，形成重度高原凍傷模型。該模型至少維持20 d,。

注意事項：應注意艙內環(huán)境恒定不變,，保證所制備模型的穩(wěn)定,，減少個體差異。

成模鑒定

外觀指標：凍傷動物模型制備成功后,，Ⅰ度凍傷：①充血或水腫,；皮膚初為蒼白色，漸轉為紅色;②無水皰形成;③皮膚發(fā)熱,、干 燥,，皮溫高;④皮膚出現紅腫、燒灼,、疼痛和刺癢感。Ⅱ度凍傷：①充血和水腫：②有水皰形成,，水皰液為漿液性或淡血性,；③水皰基地呈鮮紅色且潮濕，皮溫較高,；④全層皮膚凍傷,，局部皮膚紅腫，發(fā)癢,，觸痛覺敏感,，疼痛明顯。Ⅲ度凍傷：①出血性水皰和水腫,，水皰液為血性,、暗紅色，傷后 2 周變?yōu)?黑色焦痂,，結痂剝脫后,，露出肉芽組織；②皮膚全厚度壞死,； ③水皰基底呈紫紅或暗紅,，皮溫低下，呈青藍色,；④水皰和壞死皮膚干化后形成黑硬干痂皮,，厚而硬，觸痛覺遲鈍,。Ⅳ度 凍傷：①水皰液為血性,，呈暗紅色、咖啡色或深紫色,，體積較小,，重者可無水皰；②凍肢皮膚全厚度均壞死,；③皮膚蒼白,、 青灰色或紫藍色,；④皮膚觸痛覺消失或明顯遲鈍;⑤肢體劇烈疼痛。

造模周期

3周

后續(xù)檢測指標建議

凍傷區(qū)域皮膚取材染色：其中輕度凍傷(Ⅰ～Ⅱ度) :主要損傷皮膚,、肌肉,，早期表皮結構完整，真皮下有輕度水腫,，有少量淋巴細胞浸潤,，偶見有灶性出血；后期表皮有部分壞死,，水腫稍有加重,，有白細胞浸潤，表皮結構基本完整,。

重度凍傷(Ⅲ～Ⅳ度) ：主要損傷肌肉和骨,，表皮下有水泡，水腫明顯,，血管擴張充血,，膠原成分增多， 毛囊皺縮,，有較多的白細胞浸潤,；后期表皮及附屬器結構模糊，水腫明顯,，真皮血管擴張出血,，血管壁亦有壞死改變，有大量的炎細胞浸潤,。