一文帶你了解基因編輯技術與動物模型構建!
應廣大客戶與市場亟需,，拓普生物創(chuàng)新科研服務模式圖譜——基礎研究培訓、臨床研究培訓,、實驗動物技術,、生物信息學相關等科研培訓正式上線啦！歡迎各位科研錦鯉們共同學習探討~拓普生物以實驗動物技術為基點,，致力于建立以動物科研為核心的一站式服務平臺,，從理論到實操，全方位助力服務科研能力提升,！
課程介紹
CRISPR/Cas9 是細菌和古細菌在長期選擇壓力中形成的一種適應性免疫防御,，可用來有效抵御病毒及外源DNA的入侵。CRISPR的Type II已經(jīng)被廣泛用于基因工程,，它包含Cas9,，crRNA和tracrRNA,，其中crRNA含有能夠識別20bp的靶向互補序列。Cas9,，crRNA和tracrRNA組成復合體,，識別并結合crRNA互補的序列，然后解開DNA雙鏈,，Cas9中的HNH活性位點剪切crRNA的互補DNA鏈,，RuvC活性位點剪切非互補鏈，最終導致DNA的雙鏈斷裂（DSB）,，進而實現(xiàn)基因的敲除和插入,。
目前，CRISPR/Cas9系統(tǒng)已經(jīng)廣泛用于對哺乳動物細胞,，細菌,，斑馬魚，小鼠,，豬,，猴的基因編輯。本學習班將詳細講解CRISPR/Cas9基因編輯工具原理,，操作流程,，理論結合實踐，將讓大家詳細了解到具體如何利用CRISPR/Cas9技術構建基因修飾動物等,。學習班將為相關科研工作人員和興趣愛好者提供了很好的培訓資源,。
講師背景
李博士，副研究員,。2014年博士畢業(yè)于德國慕尼黑工業(yè)大學大型動物生物技術研究所, 獲極優(yōu)等榮譽學位（MAGNA CUM LAUDE）,。主要研究領域為基因編輯動物模型構建與應用研究，成功構建過ROSA26基因定點敲入大動物模型,、Kras基因點突變大動物模型,、小鼠基因編輯肝癌模型等，在基因編輯研究領域積累了較好的研究知識背景,，擅長對該領域知識講解和傳授,，講解深入淺出、邏輯性強,，并可針對性對基因編輯實際操作問題進行解答與啟發(fā),，以期更好地讓基因編輯工具應用于您的工作和學習研究中。目前已發(fā)表論文22篇,，其中第一作者/并列通訊作者SCI論文12篇,，以第一發(fā)明人申請國家發(fā)明專利2項。主持完成國家自然科學基金等項目6項，獲得上海市實驗動物學會2020年度學會工作先進個人,、2019年 “ICLAS-CALAS國際青年獎”,、2018年第三十屆上海市優(yōu)秀發(fā)明選拔賽銀獎、2017年上海市人才發(fā)展資金等,。
預期目標
1.掌握基因打靶與基因編輯技術(ZNF,TALENs,CRISPR/Cas9),，能夠設計sgRNA靶點，構建CRISPR/Cas9質(zhì)粒,，用于基因敲除和敲入;
2.掌握CRISPR/Cas9質(zhì)粒轉(zhuǎn)染方法, 陽性細胞克隆篩選方法體系,，基因編輯細胞系的建立，基因修飾情況分析方法;
3.掌握CRISPR/Cas9脫靶產(chǎn)生的原因,，脫靶檢測方法,，降低脫靶問題的方法;
4.掌握CRISPR/Cas9的實際應用，構建動物模型,，對構建基因修飾小鼠和基因修飾大動物（豬）有較深入了解;
5.掌握新基因編輯工具,，如：Cpf1, C2C2, base editing等;
6.掌握基因編輯研究領域前沿進展，基因編輯工具的拓展應用,、臨床應用等，形成利用基因編輯工具結合自己研究內(nèi)容等科學思維;
7.Base editor 使用方法;
8.基因編輯工具用于檢測新型冠狀病毒,、基因編輯工具有可能應用于新冠治療等應用的介紹與拓展,。
課程介紹
基因編輯技術與動物模型構建研討會日程 | |||
日期 | 時間 | 主題 | 詳細內(nèi)容 |
第一天上午 | 9:00-10:30 | 基因修飾技術簡介（一） | 基因打靶與基因編輯技術（ZNF, TALENs，CRISPR/Cas9）介紹 |
基因編輯,、基因修飾,、基因打靶、轉(zhuǎn)基因,、基因敲除,、基因敲入等專業(yè)領域概念梳理 | |||
CRISPR/Cas9結構和特點 | |||
如何使用CRISPR/Cas9系統(tǒng)對特定基因進行敲除或定點插入（詳細方法步驟） | |||
拓展如何提高定點敲入效率等知識 | |||
10:30-10:45 | 休息 | ||
10:45-12:00 | 基因修飾技術簡介（二） | 基因編輯工具Cas12（Cpf1）、Cas13（C2C2）,、Cas14的結構,、特點、工作原理 | |
如何使用Cas12（Cpf1）,、Cas13（C2C2）,、Cas14系統(tǒng)進行編輯 | |||
Cas12（Cpf1）、Cas13（C2C2）,、Cas14與Cas9的比較 | |||
Cas9,、Cas12（Cpf1）、Cas13（C2C2）,、Cas14的應用和技術展望 | |||
上午現(xiàn)場答疑 | |||
12:00-13:30 | 午飯及午休 | ||
第一天下午 | 13:30-14:00 | CRISPR（sgRNA）設計方法和相關網(wǎng)站介紹 | sgRNA設計方法和相關網(wǎng)站介紹 |
CRISPR（sgRNA）的在線設計（在線互動設計演練） | |||
14:00-15:30 | 基因編輯實驗詳細操作 | gRNA oligos模板退火 | |
退火gRNA與線性化CRISPR/Cas9載體連接 | |||
連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到大腸桿菌（DH5α）,，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板培養(yǎng)，CRISPR/Cas9重組子細菌克隆挑取，擴大化培養(yǎng),，鑒定陽性克隆 | |||
細胞轉(zhuǎn)染（Electroperation,，Nuclefection，Nanofection,，X-fection）等介紹與應用拓展 | |||
單細胞克隆篩選（有限稀釋法,，濾紙法、環(huán)法,、流式分選法等）方法介紹與應用拓展 | |||
15:30-15:45 | |||
15:45-17:00 | 利用CRISPR/Cas9技術編輯動物細胞系 | CRISPR/Cas9質(zhì)粒細胞轉(zhuǎn)染方法 | |
陽性細胞克隆篩選,，基因修飾基因組DNA模板快速制備 | |||
目的靶基因的基因組DNA片段的PCR擴增，電泳檢測PCR產(chǎn)物 | |||
PCR產(chǎn)物退火變性,，T7E1酶切,，電泳鑒定基因修飾情況 | |||
17:00-17:30 | CRISPR/Cas9關鍵點總結、歸納,、拓展 | 基因編輯關鍵知識點歸納,、總結和提煉 | |
CRISPR/Cas9技術應用拓展（如CAB基因敲入方法等介紹） | |||
第二天上午 | 9:00-10:30 | 利用基因編輯技術構建基因敲除或敲入小鼠 | 基因工程小鼠的詳細分類與比較 |
小鼠受精卵分離和培養(yǎng) | |||
CRISPR/Cas9系統(tǒng)顯微注射到小鼠受精卵 | |||
受精卵顯微注射后回輸?shù)酱心甘篌w內(nèi) | |||
PCR和T7E1分析和鑒定基因敲除小鼠（Founder） | |||
基因敲除小鼠基因敲除情況分析 | |||
CRISPR/Cas9構建基因敲除小鼠詳細實驗流程歸納和總結 | |||
10:30-10:45 | 休息 | ||
10:45-11:15 | 利用基因編輯技術構建大動物模型 | 以大動物豬為例，進行詳細介紹基因編輯技術在大動物模型中的應用 | |
利用CRISPR/Cas9構建基因修飾大型動物（豬）流程 | |||
基因修飾大型動物優(yōu)勢 | |||
利用CRISPR/Cas9構建基因修飾大動物（豬）模型介紹 | |||
11:15-12:00 | 利用基因編輯技術構建動物模型的詳細案例介紹 | 利用CRISPR/Cas9構建基因修飾小鼠方法與相關基因修飾小鼠模型 | |
利用CRISPR/Cas9構建基因修飾大動物（豬,、猴）方法與相關基因修飾大動物模型 | |||
拓展基因編輯技術在其它物種中的應用 | 拓展基因編輯技術在其它物種中的應用 | ||
12:00-13:30 | 午飯及午休 | ||
第二天下午 | 13:30-15:00 | 實驗結果的點評與討論 | CRISPR/Cas9載體構建討論 |
目的靶基因的基因組DNA片段的PCR擴增,，電泳檢測PCR產(chǎn)物結果討論 | |||
PCR產(chǎn)物T7E1酶切，電泳鑒定基因修飾情況結果討論 | |||
Sanger測序鑒定基因編輯結果：CRISPR/Cas9質(zhì)粒陽性轉(zhuǎn)化子測序結果確認,；Sanger測序閱讀基因編輯情況,；如何從測序色譜圖中閱讀靶向突變等位基因型 | |||
15:00-15:30 | CRISPR/Cas9脫靶問題分析 | 脫靶產(chǎn)生的原因 | |
脫靶檢測方法 | |||
降低脫靶問題的方法 | |||
15:30-15:45 | |||
15:45-16:30 | 基因編輯領域進展大梳理與全面拓展 | 基因編輯技術的應用拓展介紹：SHERLOCK-V1、SHERLOCK-V2等應用于檢測方面的拓展,，Base editing | |
結合當下新型冠狀病毒熱點,，基因編輯工具用于檢測新型冠狀病毒、基因編輯工具有可能應用于新冠治療等應用的介紹與拓展 | |||
Cas系列突變體的介紹與應用 | |||
基因編輯的拓展應用（如應用于杜氏營養(yǎng)肌不良綜合征,、白內(nèi)障,、消滅蚊子、植物中的應用,、細菌中的應用等） | |||
基因編輯工具的倫理問題于討論 | |||
收費標準
會務費用：線上：2800元/人
會議時間：2022年3月12-13日
會議地點：線上：騰訊會議網(wǎng)絡會議室
咨詢及報名方式
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