一,、研究背景

慢性腎衰竭(Chronicrenal failure,，CRF)是指發(fā)生在各種慢性腎臟疾病基礎(chǔ)上，由于腎單位和腎功能受到嚴(yán)重?fù)p害,，導(dǎo)致腎小球?yàn)V過率(Glomerular filtration rate,，GFR)下降,，出現(xiàn)體內(nèi)代謝產(chǎn)物的潴留、水電解質(zhì)和酸堿平衡失調(diào),、內(nèi)分泌紊亂的一種綜合征，是腎臟及腎臟相關(guān)性疾病的最終結(jié)局^[1],。

慢性腎衰竭主要病理特點(diǎn)為不斷進(jìn)展的腎小球和腎間質(zhì)的纖維化,，是幾乎所有類型的慢性腎臟病不斷發(fā)展直至終末期腎病(ESRD)的共同病理途徑^[2-3]。5/6腎臟切除模型是一種較為成熟和經(jīng)典的研究慢性腎衰腎臟纖維化發(fā)生發(fā)展機(jī)制的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，腎臟切除之后,，殘存的腎臟出現(xiàn)高壓力、高濾過,、高灌注狀態(tài),，激活氧化應(yīng)激、炎癥等病理過程,，可促進(jìn)腎臟纖維化的發(fā)生,，進(jìn)而導(dǎo)致慢性腎衰竭,。

二、實(shí)驗(yàn)方案

1,、實(shí)驗(yàn)動物：SD大鼠,，雌雄各半，6~8周齡,；

2,、CRF模型制備^[4]

大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，腹腔注射10%水合氯醛溶液麻醉,，將大鼠固定在手術(shù)板上,。首先在大鼠的脊柱兩側(cè)腎臟部位進(jìn)行皮毛剔除，碘伏對此部位常規(guī)消毒,，穿戴無菌的手套,，鋪蓋無菌的洞巾。然后沿肋脊角行左背部斜切,，手術(shù)切口約為2.0~2.5cm,，剪開大鼠的皮膚及肌肉，用左手探查左腎所在部位,，并用中指將其從腹側(cè)往切口的方向托出,，使左側(cè)腎臟充分暴露，用鑷子對腎包膜進(jìn)行剝離,，采用7號線對左腎上,、下極結(jié)扎，結(jié)扎范圍大約為皮質(zhì)2/3的腎組織,，將結(jié)扎部分切除完畢后,，立即用止血海綿壓迫左腎上下極切口以進(jìn)行止血，當(dāng)觀察到左腎手術(shù)切口無明顯的出血后復(fù)位左腎臟,，對肌肉,、皮膚進(jìn)行逐層縫合后，用碘伏進(jìn)行手術(shù)縫合口消毒,。術(shù)后連續(xù)3天用青霉素(8萬單位/100g·d)肌肉注射殺菌抗感染,。1周后進(jìn)行第2次手術(shù)，在脊柱右側(cè)斜切口,，剝離肌層,，充分暴露右腎臟，用縫合線結(jié)扎右腎門部位后,，直接切除右側(cè)腎臟,，逐層縫合后進(jìn)行手術(shù)切口消毒。同樣肌注青霉素(8萬單位/100g·d)3天,。假手術(shù)組制備的手術(shù)過程同5/6腎切除手術(shù),，但僅做雙腎被膜剝離術(shù),。

3、觀察指標(biāo)

3.1生化法檢測血清肌酐Scr,、尿素氮BUN,、尿肌酐Ucr的含量；

3.2 收集大鼠的24h尿液,，ELISA法檢測24h尿蛋白的含量,；

3.3 計(jì)算肌酐清除率Ccr^[5]

Ccr(ml/min/100g)=[尿肌酐(μmol/L)×24小時尿量(ml)]／[血肌酐(μmol/L)×體重（g）×14.4]

3.4腎臟組織病理學(xué)檢測及評分：HE染色、PAS染色,、MASSON染色

根據(jù)參考文獻(xiàn)^[6]對腎間質(zhì)纖維化程度進(jìn)行半定量評分：

隨機(jī)選取互不重疊10個視野,，400倍顯微鏡下觀察，按下列標(biāo)準(zhǔn)對腎臟病理改變進(jìn)行評分：

腎間質(zhì)細(xì)胞浸潤評分：

腎小管萎縮和間質(zhì)纖維化的慢性病變評分：按病變面積占該視野的百分比計(jì)算

腎小管萎縮病變評分

三,、參考文獻(xiàn)

[1]  葛均波,，徐永健．內(nèi)科學(xué)[M]．8版．北京：人民衛(wèi)生出版社,，2013：524．

[2]  Boor P,，Ostendorf T，Floege J．Renal fibrosis：novel insights into mechanisms and therapeutic targets[J]．Nat Rev Nephrol, 2010, 6(11)：643-656．

[3]  Duffield JS．Cellular and molecular mechanisms in kidney fibrosis[J]．Journal of Clinical Investigation, 2014, 124(6)：2299-2306．

[4]  Xiao Q, Guan Y, Li C, et al. Decreased expression of transforming growth factor-β1 and α-smooth muscle actin contributes to the protection of lotensin against chronic renal failure in rats[J]. Ren Fail. 2018 ,40(1):583-589. 

[5]  Li HY,  Hou FF,，Zhang X,，et a1．Advanced oxidation protein products accelerate renal fibrosis in a remnant kidney model[J]. J Am Soc Nephrol, 2007，18(2)：528-538．

[6]陳琇萌,，俞小敏,，肖潔. 尿毒清顆粒抑制大鼠腎臟間質(zhì)纖維化作用靶點(diǎn)研究[J]. 湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2017,，37（1）：33-37.