心肌梗死(myocardial infarction,，MI)是一種嚴(yán)重的心血管疾病,，由于冠狀動(dòng)脈血供急劇減少或中斷,，使心肌持續(xù)性缺血缺氧以致壞死，損害心功能且可能導(dǎo)致心律失常,、休克以及心力衰竭等嚴(yán)重后果,。

目前建立心肌梗死動(dòng)物模型的方法有多種，包括：冠脈結(jié)扎法,、藥物法,、栓塞法、左室電灼法,、液氮冷凍法等^[1,2],。其中藥物法主要通過舌下靜脈注射垂體后葉素誘發(fā)血管痙攣促使心肌缺血梗死；后三種方法可直接形成冠脈閉塞,，但對(duì)輔助設(shè)備要求高,，操作難度大；冠狀動(dòng)脈結(jié)扎法操作成熟簡便,，梗阻部位明確易于判斷,，既符合心梗發(fā)生的實(shí)際病理過程，又便于開展實(shí)驗(yàn)研究,，故主要采用此法建立心梗模型^[3,4],。

1 MI模型制備

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

依實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌蛇x用SPF級(jí)C57BL/6J雄性小鼠或雄性SD大鼠。

1.2麻醉與術(shù)前準(zhǔn)備

實(shí)驗(yàn)鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周,。術(shù)前禁食12 h,。將實(shí)驗(yàn)鼠放進(jìn)連接好的麻醉機(jī)誘導(dǎo)箱，調(diào)整異氟烷濃度至5%,，完成誘導(dǎo)麻醉后將實(shí)驗(yàn)鼠固定在手術(shù)板上,，調(diào)整異氟烷濃度至2%，連接面罩并持續(xù)吸入,。

1.3手術(shù)操作

實(shí)驗(yàn)鼠仰臥位固定,，左前胸手術(shù)區(qū)域常規(guī)備皮消毒。觸及實(shí)驗(yàn)鼠心尖搏動(dòng)最明顯的肋間,，距胸骨左緣約1.5~2 cm皮膚(大鼠),，1cm(小鼠)處做長約1cm斜切口，逐層鈍性分離胸壁肌肉,，從第3或第4肋間隙快速打開胸腔,，用止血鉗撐開肋間隙，輕輕擠壓使心臟從孔隙中彈出,。在左心耳下緣與肺動(dòng)脈圓錐交界處找到冠狀動(dòng)脈前降支,，距其根部1-2mm處用7-0線穿過并結(jié)扎，結(jié)扎后出現(xiàn)心肌搏動(dòng)減弱,，心肌組織變蒼白,。結(jié)扎操作時(shí)間≤10 s,，結(jié)扎完成后輕柔地將心臟送回胸腔，快速擠壓胸腔排出空氣,，逐層關(guān)閉胸腔,，開胸操作時(shí)間≤30 s，4-0線縫合皮膚,，完成手術(shù),。術(shù)中逐步調(diào)整異氟烷濃度至0，脫離面罩后將實(shí)驗(yàn)鼠置于恒溫墊上約3~5 min即可蘇醒,。術(shù)后連續(xù)3天肌肉注射青霉素殺菌抗感染,。

2模型評(píng)價(jià)

心梗模型的評(píng)價(jià)根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康募皩?shí)驗(yàn)動(dòng)物的存活狀態(tài)分為活檢和尸檢。

2.1活檢—影像學(xué)檢測法

(1)肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖

心梗術(shù)后即刻與術(shù)后4h,，實(shí)驗(yàn)鼠以異氟烷吸入麻醉后仰臥位固定,，連接心臟導(dǎo)聯(lián)線，并將針電極分別固定在右上肢,、左上肢,，右下肢接地，避免周圍磁場干擾,。待基線平穩(wěn)后,，記錄4-5個(gè)心動(dòng)周期。心電圖ST段弓背向上抬高并持續(xù)15 min以上作為評(píng)判心肌梗死造模成功的標(biāo)志,。

正常心電圖

心梗模型心電圖

(2)超聲心動(dòng)圖^[5]

實(shí)驗(yàn)鼠以異氟烷吸入麻醉后仰臥位固定,，M型超聲模式下記錄實(shí)驗(yàn)鼠心臟舒張期室間隔厚度(IVS:d)、舒張期左室內(nèi)徑(LVID:d),、舒張期左室后壁厚度(LVPW:d),、收縮期室間隔厚度(IVS:s)、收縮期左室內(nèi)徑(LVID:s),、收縮期左后室壁厚度(LVPW:s)及射血分?jǐn)?shù)(EF%)值,。

2.2尸檢—染色法

(1)伊文思藍(lán)和四氮唑(TTC)染色評(píng)估梗死面積^[1,6]

心梗術(shù)后24 h，實(shí)驗(yàn)鼠以異氟烷吸入麻醉后仰臥位固定,，徹底暴露胸腔,，將10g/L的伊文思藍(lán)經(jīng)心尖部注入心腔，完畢后迅速取出心臟,，反復(fù)用預(yù)冷的0.9%氯化鈉溶液進(jìn)行沖洗并剪除殘留包膜及血管,，用濾紙吸干，肉眼觀察心梗部位,，并拍照記錄,。

保留全心室稱重，記為M1 (mg),。全心室心臟標(biāo)本置于–20 ℃冷凍約30 min后,，在結(jié)扎線水平下將心臟切成厚度為1 mm左右的薄片5-6片，浸入2%TTC磷酸緩沖液中,，37℃孵育15min,。用4％的甲醛固定24h , 以增強(qiáng)染色顏色對(duì)比，對(duì)切片進(jìn)行掃描拍照,。正常心肌染成藍(lán)色,，缺血心肌染成磚紅色，梗死心肌不著色,。剪下白色梗死區(qū)域用濾紙吸干后稱重,，記為 M2 (mg)，梗死區(qū)大小計(jì)算以百分比表示,，

梗死大小(%)= (M2 /M1)×100%,。

四氮唑(TTC)染色

伊文思藍(lán)+四氮唑(TTC)染色

(2)Masson三色法^[7]

心梗術(shù)后24 h，實(shí)驗(yàn)鼠以異氟烷吸入麻醉后仰臥位固定,，徹底暴露實(shí)驗(yàn)鼠胸腔,，剪破右心耳，立即用預(yù)冷的PBS進(jìn)行腹主動(dòng)脈灌注,，灌注完畢后迅速取出心臟,，反復(fù)用預(yù)冷的0.9%氯化鈉溶液進(jìn)行沖洗并剪除殘留包膜及血管，用濾紙吸干,，置于-20 ℃冰箱速凍15分鐘,，沿心臟長軸結(jié)扎點(diǎn)以下2mm連續(xù)切5-6片厚度為1mm的切片，4 %甲醛固定24h后進(jìn)行masson染色,。用自動(dòng)顯微照相系統(tǒng)及微機(jī)圖像分析系統(tǒng)測定瘢痕弧長以及心內(nèi)膜和心外膜周長,。

心肌梗死面積=瘢痕弧長/[(外周長+內(nèi)周長)/2]×100%

參考文獻(xiàn)

[1]胡文君,王品,鄭斯莉,汪東昇,繆朝玉.小鼠心梗模型的建立與早期心電圖評(píng)價(jià)[J].藥學(xué)實(shí)踐雜志,2020,38(02):115-119.

[2]劉建,范慧敏,汪進(jìn)益,張治國,曹浩,蘭琴,史乾,唐光亮,劉中民.小鼠心梗模型的建立與無創(chuàng)評(píng)價(jià)[J].中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào),2010,18(03):196-198+282.

[3]KUMAR M,KASALA E R,BODDULURU L N,et al.Animal models of myocardial

Infarction:Mainstay in clinical translation[J].Regul Toxicol Pharmacol,2016,76:221-230.

[4]TANG Y P,LIU Y,FAN Y J,et al.To develop a novel animal model of myocardial

infarction:a research imperative[J].Anim Models Exp Med,2018,1(1):36-39.

[5]Agnoletti G,Cargnoni A,Agnoletti L,et al.Experimental ischemic cardiomyopathy:insights

into remodeling,physiological adaptation,and humoral response[J].Ann Clin Lab Sci,2006,36(3):333-340

[6]GUO Y R,WU W J,QIU Y M,et al.Demonstration of an early and a late phase of ischemicpreconditioning in mice[J].Am J Physiol-Heart Circ Physiol,1998,275(4):H1375-H1387.

[7]梁麗玲,楊庭樹,李萍,馮斌,韓寶石.同種異體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療大鼠急性心肌梗死[J].中國組織工程研究,2014,18(37):5983-5987.