簡述眼球結(jié)構(gòu)：

眼是一個可以感知光線的器官,。眼睛通過把光投射到對光敏感的視網(wǎng)膜成像,，在那里，光線被接受并轉(zhuǎn)化成信號并通過視神經(jīng)傳遞到腦部。通常眼睛是球狀的，當(dāng)中充滿透明的凝膠狀的物質(zhì)，有一個聚焦用的晶狀體,，通常還有一個可以控制進(jìn)入眼睛光線多少的虹膜。眼球壁主要分為外,、中,、內(nèi)三層。

外層是纖維膜,，由角膜,、鞏膜組成,。角膜含豐富的神經(jīng)，感覺敏銳,。角膜除了是光線進(jìn)入眼內(nèi)和折射成像的主要結(jié)構(gòu)外,，也起保護(hù)作用，并是測定人體知覺的重要部位,。鞏膜為致密的膠原纖維結(jié)構(gòu),，不透明，呈乳白色,，質(zhì)地堅韌,。

中層又稱葡萄膜，色素膜,，具有豐富的色素和血管,，包括虹膜、睫狀體和脈絡(luò)膜三部分,。

內(nèi)層為視網(wǎng)膜,，是一層透明的膜，也是視覺形成的神經(jīng)信息傳遞的第一站,，具有很精細(xì)的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)及豐富的代謝和生理功能,。

眼內(nèi)腔：包括前房、后房和玻璃體腔,。眼內(nèi)容物包括房水,、晶體和玻璃體。三者均透明的,，與角膜一起共稱為屈光介質(zhì),。玻璃體有屈光作用，也起支撐視網(wǎng)膜的作用,。

 （小鼠眼球結(jié)構(gòu),，插圖來源：中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院神經(jīng)科學(xué)研究）

眼球注射作用：

小鼠眼球結(jié)構(gòu)（圖片來源：網(wǎng)絡(luò)搜集）

眼球作為相對獨立的器官，球內(nèi)注射是最有效的藥物遞送方式,。眼球注射可突破血眼屏障,使藥物迅速濃集于眼內(nèi), 繼而在眼內(nèi)擴(kuò)散到達(dá)作用部位,。

具有代表性的眼內(nèi)注射給藥途徑有視網(wǎng)膜下(subretinal)注射和玻璃體腔(Intravitreal)注射，玻璃體內(nèi)注射能夠使基因藥物可以較快擴(kuò)散至視網(wǎng)膜或脈絡(luò)膜部位,，如臨床上常用于老年性黃斑變性的藥物輸送；視網(wǎng)膜下注射可將藥物直接傳遞到視網(wǎng)膜和視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(RPE)之間的潛在空間,，是將藥物直接遞送至RPE細(xì)胞的最佳方法,。

實驗步驟：

實驗器械及耗材：吸入式麻醉機(jī)、Hamilton注射器(30G,、33G),、托品酰胺,、去氧腎上腺素、手術(shù)顯微鏡

實驗大體分為：麻醉-擴(kuò)瞳-預(yù)切口-注射

麻醉：

1. 小鼠置于誘導(dǎo)盒內(nèi)進(jìn)行吸入式異氟烷麻醉,，捏合小鼠腳指確認(rèn)是否麻醉完全;

2. 將老鼠轉(zhuǎn)移到解剖顯微鏡下,，連接鼻錐持續(xù)給予異氟烷;

3. 待注射眼睛滴加一滴丙美卡因(或類似的表面麻醉劑)防止注射引起局部反射，輕觸結(jié)膜確定麻醉深度,；

擴(kuò)瞳:

1. 傾斜鼠標(biāo)頭部,，使待注射眼睛在視野范圍內(nèi)，用棉簽擦去任何多余的液體,；

2. 向待注射眼球滴加1-2滴1%托品酰胺和0.5%去氧腎上腺素用于擴(kuò)大瞳孔,；

鞏膜切口（預(yù)切口）:

1. 使用鑷子在上下眼瞼之間滑動，使眼球從眼窩中伸出,，暴露鞏膜;

2. 采用30G針頭在角鞏膜緣后面做一個小的鞏膜預(yù)切口(推薦小鼠可以用 ALCON 的 10-0 針做切口,，非常整齊，33 G 的針進(jìn)去水密非常好;也可以用破囊針;切口越整齊,，與針越匹配,，越不易滲漏)；

注射：

1. 用鑷子捏緊緣下約1mm處的結(jié)膜保持眼球穩(wěn)定,；

2. 將裝好注射液的33G注射針頭,，相對視神經(jīng)約60度角，從角鞏膜緣后預(yù)切口,，插入約1mm進(jìn)行玻璃體腔注射,；操作注射器平穩(wěn)注入適量液體，注意注射過程避免晃動引起額外的組織損傷,；注射后停留針頭約30秒以防漏液,，然后將針頭慢慢抽出，重新放置結(jié)膜,，輕輕將眼睛放回眼窩,，閉上眼瞼；如果需要雙側(cè)眼球注射,，將另一面眼球轉(zhuǎn)到顯微鏡視野下重復(fù)上述步驟,，注射后可在角膜和注射區(qū)域涂抹抗生素眼藥膏防止感染

注射示例（圖片來源：網(wǎng)絡(luò)搜集）

 圖注：注射前(左一)與注射后(右一)

注意事項：

眼球注射過程應(yīng)確保動物眼睛一直濕潤，避免角膜干燥,，可根據(jù)需要多次使用潤滑滴眼液,；

注射過程應(yīng)緩慢進(jìn)行，避免速度過快造成液體從注射部位回流,；

眼球注射前應(yīng)充分?jǐn)U瞳,，建議雙眼散瞳，以防一眼出現(xiàn)意外時可以迅速換眼；瞳孔過小不易看清眼底,，會降低注射成功率,，同時瞳孔過小也是虹膜出血的主要原因；

角膜穿刺點靠近角鞏緣處為好,，以免形成角膜白斑而影響后續(xù)動物實驗,；

注射時針尖應(yīng)垂直進(jìn)入，隨后傾斜,；小鼠眼球小且晶體球形,，傾斜角度小會損傷晶體，大會扎上視網(wǎng)膜導(dǎo)致出血,；需要注意晶狀體占據(jù)玻璃體腔的大部分,，應(yīng)小心避免刺穿晶狀體；

推注液體時應(yīng)當(dāng)控制速度,，迅速推注取材時會發(fā)現(xiàn)視網(wǎng)膜散在出血點,，可能干擾試驗結(jié)果；推針以后留針 0.5-1 min,，迅速出針,；

注射結(jié)束后需要檢查，若術(shù)中損傷視網(wǎng)膜血管會立刻出血,，此刻建議剔除,；術(shù)后若晶體變?nèi)祝?/span>2-3 h 后會全部恢復(fù)；若晶體損傷可在術(shù)中發(fā)現(xiàn),，術(shù)后會逐漸出現(xiàn)局限的混濁,。

參考文獻(xiàn)：

[1]SmithLEH，WesolowskiE,，Mcle1lanA,，eta1.0xygen-inducedretInop athyinthemouselnVes t ophthalmolVissci，1994,；35：101-111

[2]惠蓉,，主編.視網(wǎng)膜病臨床和基礎(chǔ)研究.太原：山西科學(xué)技術(shù)出版社，1995.32

[3]PierceEA,，AveryRL,，FoleyE，Aie11oLP,，SmihLE.Vascularendothelialgrowhfacor/vascularpemeabiliyfacorexpressioninamousemode1ofreinalneovascularizaion.ProcNalAca dSciU SA,，1995：92：905-909

[4]鄧娟，吳德正,，高汝龍等,。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子,、谷氨酸,、r-氨基丁酸與增生性糖尿病視網(wǎng)膜病變的新生血管形成,。中華眼底病雜志，2000,；16（3）：162-16