垂體,,位于丘腦下部的腹側(cè),,為一卵圓形小體,,由前中后三葉組成,分泌10種含氮激素,,與動物的生長,、性別、代謝,、泌乳,、血壓及色素形成密切相關(guān),是身體內(nèi)最復(fù)雜的內(nèi)分泌腺,,所產(chǎn)生的激素不但與身體骨骼和軟組織的生長有關(guān),,且可影響內(nèi)分泌腺的活動。
去垂體動物模型為觀察外源性垂體激素的上述活性提供了一個手段,,已用于生長激素,、促腎上腺皮質(zhì)激素等的活性測定,是神經(jīng)內(nèi)分泌研究中非常有用的實驗動物模型之一,咽旁入路大鼠腦垂體切除術(shù)是建立模型較為常用的方法,。
一,、實驗動物
可選用SPF級雄性SD大鼠
二、麻醉與術(shù)前準備
制備方法:大鼠經(jīng)3%的戊巴比妥鈉(0.16ml)腹腔注射麻醉,,仰臥位放置,利用門齒將頸部牽引拉直,,上頸部消毒剃毛,。
顱鉆:(直徑1.8mm),在離鉆頭端1.0~1.5mm處用透明膠布裹一寬約6mm,、厚約0.05mm的限制帶,,鉆桿連在一塑料管上即成。
垂體吸取裝置:由玻璃吸頭,、抽濾瓶,、真空泵及連接三者的橡皮管組成
三、手術(shù)準備
大鼠沿頸部正中自下頜部乳頭突起向下剪開長1.5~2.5cm皮膚,,沿肌纖維走向鈍性分離皮下組織,、唾液腺,暴露氣管,。距氣管中線左側(cè)或右側(cè),,打開頸前筋膜,將唾液腺左右葉拉向兩側(cè),。用注射器針頭在3-4氣管軟骨環(huán)間刺入,,針頭抽出后,沿針頭刺入軌跡插入PE50或PE90管,。在動物氣管旁用兩個彎鑷交替鈍性分離胸骨舌骨肌和甲狀舌骨肌肌間組織至顱底,。注意避免損傷血管及神經(jīng),。
手術(shù)拉鉤于組織分離區(qū)域?qū)⒓∪饨M織和氣管向兩側(cè)拉開充分暴露顱底。用牙科改制刮刀刮除顱底骨膜及表面附著的組織,,暴露蝶枕水平骨縫隙,。用電鉆在顱底部*鉆孔進入顱內(nèi)。垂體就位于鉆孔的的下方,。置牙科探針進入鉆孔,,探針尖端緊貼顱內(nèi)壁剝離垂體表面被膜組織后,移除探針,。
用負壓吸管連接320-500mmHg負壓泵吸出垂體,。用棉簽及紗布術(shù)區(qū)止血后,卸除外科拉鉤,。動物恢復(fù)呼吸后,,移除氣管插管。復(fù)位胸骨舌骨肌充分覆蓋氣管切開孔,,縫合皮膚切口,。
術(shù)后護理術(shù)后蘇醒前應(yīng)注意大鼠口腔或氣管中的分泌物以防窒息。醒后給清潔飲水,,手術(shù)中失血多者考慮皮下注射10~15ml林格氏液,,或以葡萄糖生理鹽水做飲水。因去垂體大鼠的能量代謝水平降低,,故注意保溫,。
四、注意事項
麻醉:根據(jù)手術(shù)所需時間確定麻醉藥劑量,,麻醉不宜過深,,以免抑制呼吸和循環(huán),以手術(shù)一完畢,,動物即能活動為宜,。這樣術(shù)后動物能盡快飲水進食,有利于體質(zhì)恢復(fù),。
鉆孔:孔位置應(yīng)在正中,。從氣管左側(cè)行鉆,鉆孔易偏向右側(cè),;反之亦然,,致使對側(cè)垂體不易吸出。鉆孔時,,需耐心用針測試所鉆骨層厚度,,逐步增加鉆頭深度,直至薄薄一層,,燈下可見透亮,。然后向外挑出薄層骨,,不讓骨片落入腦室內(nèi),這是手術(shù)成敗的關(guān)鍵所在,。
吸取力量:吸頭的真空抽吸力量應(yīng)適度,,以能輕輕吸起掌肌為宜,以免吸力過大,,損傷腦實質(zhì),,可通過連在橡皮管上的調(diào)節(jié)夾來調(diào)節(jié)吸力。
鉆孔封堵:因術(shù)后孔周組織能將鉆孔封住,,故薄骨片挑出后,,鉆孔可不作處理,也不必將骨片放回,,不影響模型的成功,。
口腔清潔:術(shù)中注意防止窒息,隨時將氣管或口腔內(nèi)的分泌物吸除,。
五,、模型評價
術(shù)后檢測:
1、解剖動物,,證實垂體全部切除,。沒有造成不必要副損傷(神經(jīng),血管,,下丘腦,,咽后壁);模型動物的體重增量相對正常動物顯著減少
2,、血清學(xué)檢測建立標準。垂體前葉激素有6種,,可選擇促腎上腺皮質(zhì)激素,,促甲狀腺素,促卵泡激素,,促黃體生成激素血液卵泡刺激素(FSH)和促甲狀腺激素(TSH),;垂體后葉激素有2種,可選擇抗利尿激素和縮宮素,;腦垂體切除模型各激素水平相對于正常動物低下,。
3、骨密度(BMD)檢測:造模前后大鼠麻醉后平躺于X線骨密度儀下,,以小動物專用軟件模塊測定大鼠全身骨密度和骨礦含量,。計算骨組織總面積(T.Ar)和骨小梁面積(Tb.Ar)、骨小梁周長(Tb.Pm),、骨小梁厚度(Tb.Th)降低,,骨小梁分離度(Tb.Sp),。
Tb.Th可解釋骨量變化,在骨小梁一定的情況下,,厚度越大,,骨量越多,當Tb.Th值減小以及Th.Sp值增大,,即骨小梁之間距離加大,,表明骨結(jié)構(gòu)不好,骨吸收增加,,可能發(fā)生骨質(zhì)疏松,。