國際著名病理學家Karl Lennert曾經說過：“技術是病理學之母”。病理組織學屬于形態(tài)學檢驗,，組織病理學是將病變組織制成厚約數微米的切片,，經不同方法染色后用顯微鏡觀察其細微病變，對疾病做出病理學診斷,。組織病理分析是檢驗大多數動物模型實驗成功與否的金標準,。病理學基本檢驗技術包括組織固定、石蠟制片,、蘇木素-伊紅染色及常用特殊染色技術,。

“操千曲而后曉聲，觀千劍而后識器”,，閱讀下文自測病理組織學知識你知多少~

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一、石蠟切片與冰凍切片

（一）石蠟切片制備流程

（二）冰凍切片制備流程

TIPS：石蠟切片和冰凍切片如何選擇?

1,、冰凍切片優(yōu)點制片時間短,，時間快；缺點保存時間短,；

2,、石蠟切片對組織的形態(tài)保存比冰凍切片好,標本可以長期保存；

3,、常規(guī)染色,，組化優(yōu)先推薦做石蠟切片；

4,、免疫熒光推薦用冰凍切片 (石蠟有自發(fā)熒光),；

5、脂質染色,、ROS染色,、 ATP染色，膽固醇染色推薦做冰凍切片,。

二,、HE染色

蘇木精 — 伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，簡稱HE染色法 ,，石蠟切片技術里常用的染色法之一 ,。HE染色法是組織學、胚胎學,、病理學教學與科研中最基本,、使用最廣泛的技術方法。

圖注：拓普生物HE染色圖

圖注：HE染色實驗流程圖

HE染色過程可能出現(xiàn)問題：

1,、HE染色最常見的紅藍失調

偏藍色：蘇木素染色過深,，分化不夠；伊紅試劑過期,；伊紅染色時間太短,，分化過度。

偏紅色：蘇木素染色過淺,，分化過度,；組織固定不佳，細胞核不著色,；脫蠟不徹底,，蘇木素染不上；蘇木素氧化成熟不夠；伊紅染色過深,，分化不足,。

2、HE染色后出現(xiàn)的大白色斑塊或斑點

答：脫蠟前烤片溫度偏低,，時間過短,，蠟未完全融化；切片在脫蠟溶劑中停留時間過短,；脫蠟溶劑使用太久,，得更新。

3,、細胞核染色過淺,，顏色暗淡

答：切片在蘇木素染液中停留過短，或蘇木素過度氧化失效,，或分化時間太長,。對策：重新染色。將組織切片放入0.01%氫氧化鈉,、0.5%氨水,、飽和的碳酸氫鈉溶液、乙醇溶液,，每個3-5min即可,，接著重新染色?？梢赃m當地組織的嗜堿性以增強核染色,，如Zenker液固定的切片可放入5%碳酸氫鈉溶液中3h，自來水沖洗5-10min染色,，或Bouin液固定的切片可放入5%碳酸氫鈉溶液中1h,，自來水沖洗10min染色。

4,、細胞核染色過深,，胞漿著藍色

答：切片在蘇木素染液中停留過長；或切片太厚,；或分化時間太短,。這種情況首先鏡下看看切片厚度(最佳厚度1-2層細胞核)，要么重新染色,，要么重新制片,。

5、細胞核呈棕紅色改變

答：蘇木素染液過度氧化,；或蘇木素染色后反藍不足導致。應該立即更換蘇木素染色液?；蛟诹鲃幼詠硭?一般自來水PH7.5-7.8),，或在稀釋的氨水溶液，或在0.2%碳酸氫鈉中適當浸泡,，這些步驟均可一定程度地加強蘇木素染色后的反藍效果,。

6、伊紅染色較淡

答：伊紅的PH改變了(PH可能已大于5),；或反藍液體未漂洗干凈,，殘留后影響胞漿嗜酸性染色；或者切片太薄并且在隨后的脫水步驟停留過久,。對策：檢查伊紅染色液PH,，可采用乙酸調至4.6-5.0。根據以上提示,，調整實驗步驟,。

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三、免疫組化

免疫組化是應用抗原與抗體特異性結合的原理,，通過化學反應使標記抗體的顯色劑（熒光素,、酶、金屬離子,、同位素）顯色來確定組織細胞內抗原（多肽和蛋白質）,，對其進行定位、定性及相對定量的研究,，稱為免疫組織化學技術,。

圖注：拓普生物免疫組化圖

圖注：免疫組化實驗流程圖

圖注：拓普生物其他染色圖

四、各類組織常見染色方法及指標

拓普生物病理組織學技術服務

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