圍產(chǎn)期窒息所致缺氧缺血性腦病(HIE)為新生兒期危害最大的常見病之一,常引起新生兒死亡和后期的神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育障礙,現(xiàn)階段對缺氧缺血性腦損傷尚無根本性的防治措施,。

HIBD的發(fā)病原因及發(fā)病機制較為復(fù)雜,；為了對該領(lǐng)域進一步深入研究,模擬新生兒分娩前后窒息的經(jīng)過，建立缺氧缺血性腦損傷（HIBD）實驗動物模型來進行相關(guān)研究已被許多人采用,。

缺氧缺血性腦損傷建模方法為：

1. 缺血部分：將新生鼠頸部常規(guī)消毒,，頸正中作一切口。對HIBD組,，切開皮膚后用血管鉗分離頸總動脈后用無創(chuàng)縫合線雙重結(jié)扎橫斷左頸總動脈,，檢查斷流成功后縫合切口；

2. 缺氧部分：放入37℃恒溫的密閉缺氧箱內(nèi),，向缺氧箱內(nèi)通含 8%氧氣和 92%氮氣的混合氣體（氣流量 0.5L/ min,，溫度為 37℃,，濕度為 70% ±5%），缺氧1小時,；缺氧后回籠,；

3. 缺氧后回母鼠身邊繼續(xù)哺乳喂養(yǎng)或安排人工喂養(yǎng)存活。

模型驗證：

1. 傳統(tǒng)方法：劃分時間點取材進行TTC染色,， HIBD損傷后 72 小時的梗塞區(qū)域范圍,；

圖1 TTC 染色^[1]

2. 行為學(xué)檢測：

如水迷宮：通過記錄測試小鼠在每個象限中花費的時間、在訓(xùn)練的平臺位置上的經(jīng)過次數(shù)和在未訓(xùn)練的象限中的類似位置所花費的時間進行比較來評估探索試驗中測試小鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力,；

圖2 水迷宮檢測^[2]

礦場實驗-利用小鼠的天性,，對其緊張度和探索性行為進行判斷，系統(tǒng)評估小鼠的探索能力,、基本運動能力以及焦慮行為,。如果小鼠更傾向于在曠場試驗箱中間運動，解讀為抗焦慮行為,，反之則為焦慮行為,。

3. 病理染色

可選擇HE染色：

造模后24 h，新生大鼠損傷側(cè)海馬CA1區(qū)神經(jīng)細胞形態(tài)學(xué)變化 HE染色,，假手術(shù)組神經(jīng)細胞排列整齊,，形態(tài)規(guī)則；HIBD組神經(jīng)細胞排列疏松紊亂,。

圖3 HE染色^[3]

可選擇尼氏染色：正常動物尼氏小體排列整齊,，數(shù)量多，無空隙為完好,；HIBD模型動物尼氏小體數(shù)量少,，且稀松不整齊，空隙很大為損傷,。

腦癱不及時的治療,，其行為將會受到阻礙，大量實驗和臨床資料表明,，腦的邊緣訓(xùn)練特別是海馬區(qū)受損的時候,，可引起患兒的情緒異常,，患兒常表現(xiàn)為好哭,，任性，固執(zhí),，偏執(zhí),，脾氣古怪，情感脆弱,，易于激動,，有的情感不穩(wěn)定等手足蠕動的患者較為多些,。

而轉(zhuǎn)化為動物實驗，建立HIBD模型,、應(yīng)用一側(cè)頸總動脈結(jié)合缺氧的方法制作新生乳鼠缺血缺氧腦損傷動物模型,，觀察其行為學(xué)、學(xué)習(xí)記憶功能及腦組織病理變化,，探討新生乳鼠缺血模型的評價方法,。亦可在該模型基礎(chǔ)上建立基因組測序、藥物治療,、干細胞治療研究,、益生菌及腸道菌群治療研究等。

圖片來源：

[1] Zeng W, Wang Y, Xi Y, Wei G, Ju R. Bone marrow mesenchymal stem cells overexpressing hepatocyte growth factor ameliorate hypoxic-ischemic brain damage in neonatal rats. Transl Neurosci. 2021 Dec 17;12(1):561-572. doi: 10.1515/tnsci-2020-0204. PMID: 35003786; PMCID: PMC8684041.

[2] He X, Zhang T, Zeng Y, Pei P, Liu Y, Jia W, Zhao H, Bi M, Wang S. Sodium butyrate mediates histone crotonylation and alleviated neonatal rats hypoxic-ischemic brain injury through gut-brain axis. Front Microbiol. 2022 Oct 20;13:993146. doi: 10.3389/fmicb.2022.993146. PMID: 36338029; PMCID: PMC9631217.

[3] Zhang XY, Liu CM, Ma YH, Meng N, Jiang JY, Yu XH, Wang XL. TXNIP/Trx-1/GPX4通路促進新生大鼠缺氧缺血后海馬神經(jīng)元鐵死亡的作用機制 [The TXNIP/Trx-1/GPX4 pathway promotes ferroptosis in hippocampal neurons after hypoxia-ischemia in neonatal rats]. Zhongguo Dang Dai Er Ke Za Zhi. 2022 Sept 15;24(9):1053-1060. Chinese. doi: 10.7499/j.issn.1008-8830.2205149. PMID: 36111726; PMCID: PMC9495243.