肝臟解剖結(jié)構(gòu)
(1)肝分五葉,,左外葉,、左中葉,、中葉、右葉和尾狀葉(右葉和尾狀葉都是由兩葉組成),;
(2)肝漿膜:肝漿膜下注射對(duì)肝實(shí)質(zhì)無(wú)損傷,,可用于藥物或細(xì)胞注射且可使其直接接觸肝實(shí)質(zhì);
(3)隔肝系膜:維系膈肌與肝左葉,、中葉前面以及膽囊,。各個(gè)肝葉間也有多個(gè)系膜維系;
(4)肝動(dòng)脈和門靜脈,;肝動(dòng)脈:發(fā)自腹主動(dòng)脈干,,運(yùn)送氧氣入肝臟;門靜脈:匯集腸胃,、胰腺,、脾臟的靜脈血送入肝臟(用于靜脈注射,、采血和插管。門靜脈不可堵塞,、不可結(jié)扎),;肝靜脈:血液流出肝臟的血管,,匯入后腔靜脈,。
(5)膽囊和膽總管;膽囊:夾在肝左葉和肝中葉之間,,膽囊的血管匯入門靜脈,;膽總管:各個(gè)肝葉的膽管及胰管共同匯入膽總管,最后進(jìn)入十二指腸壺腹部,。(壺腹部為膽總管在十二指腸內(nèi)的開(kāi)口部位,,次開(kāi)口常用于膽總管逆向插管和注射。)
大小鼠肝缺血再灌注損傷模型
1)模型背景:
對(duì)于肝臟疾病晚期患者通常采用手術(shù)對(duì)其進(jìn)行治療,,但在肝臟移植或者切除的過(guò)程中,,為防止患者大出血,會(huì)進(jìn)行缺血處理,,而肝缺血再灌注損傷也是目前肝臟手術(shù)或者移植過(guò)程中一個(gè)重要問(wèn)題,。因此建立一種穩(wěn)定,簡(jiǎn)單經(jīng)濟(jì)的全肝缺血再灌注模型,,對(duì)于研究其發(fā)生機(jī)制,,預(yù)防及治療具有重要意義。
缺血再灌注損傷,,即缺血器官,、組織重新獲得血液供應(yīng),不僅不能使組織,、器官功能恢復(fù),,反而加重了功能代謝障礙及結(jié)構(gòu)破壞。對(duì)麻醉動(dòng)物的肝中葉和肝左葉的門靜脈和肝動(dòng)脈進(jìn)行阻斷和再通,,由于肝臟中葉和左葉血流的阻斷和再通,,引起肝臟中葉和左葉明顯的再灌注損傷。肝臟缺血過(guò)程中由于肝細(xì)胞內(nèi)ATP迅速耗盡,,導(dǎo)致乳酸酮體等的堆積,,及線粒體氧化磷酸化功能低下,引發(fā)代謝性酸中毒,,缺血過(guò)程中細(xì)胞缺氧使ATP含量下降,,導(dǎo)致肝細(xì)胞內(nèi)外Ca2 +重新分布,即Ca2 +內(nèi)流,,引起線粒體的損傷,。再灌注過(guò)程中由于氧自由基的爆發(fā)性增多,中性粒細(xì)胞的聚集,kupffer細(xì)胞的激活,,細(xì)胞凋亡及其他多種細(xì)胞因子的作用,,使得肝細(xì)胞膜損傷,內(nèi)皮細(xì)胞損傷及肝臟微循環(huán)障礙等導(dǎo)致肝臟功能代謝障礙及結(jié)構(gòu)破壞,。
2)器械與耗材:
剪刀,、鑷子、無(wú)創(chuàng)血管夾,、4-0縫合線,、紗布、生理鹽水,、碘伏,、棉簽、計(jì)時(shí)器
3)操作方法:
1. 麻醉大鼠(小鼠),,仰臥位擺放實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,,沿腹中線中上部剪一小口(開(kāi)口大小據(jù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大小及操作手法而定,原則上越小越好),,用棉簽輕輕翻動(dòng)肝葉,,分離出肝臟左葉與中葉,暴露肝蒂,,分離肝門靜脈,。
2. 將肝左葉與中葉的肝門靜脈和肝動(dòng)脈用無(wú)創(chuàng)血管夾夾閉,可使約70%的肝臟缺血,,30s后與非阻斷的右葉相比,,肉眼可見(jiàn)阻斷葉明顯變白,說(shuō)明阻斷成功,。
3. 使用棉簽將肝臟送回后,,用止血夾暫時(shí)夾閉開(kāi)口,生理鹽水浸潤(rùn)后的紗布覆蓋傷口處,。
4. 動(dòng)物放于保溫墊上,,麻醉完成持續(xù)缺血30min~90min后,重新打開(kāi)腹腔,,迅速取出血管夾,,恢復(fù)缺血肝血流,30s左右可見(jiàn)缺血區(qū)肝臟由白色逐漸恢復(fù)為鮮紅色表明再灌注成功,,逐層縫合腹腔肌肉和皮膚關(guān)閉腹腔,,完成手術(shù)。
技術(shù)討論
(1)分離肝門時(shí)用棉簽進(jìn)行分離,,可避免對(duì)肝臟的損傷,;
(2)阻斷血流要一次成功,,否則會(huì)造成缺血預(yù)處理,減輕損傷程度,;
(3)術(shù)前禁食有利于手術(shù)進(jìn)行,;
(4)取材時(shí)鑷子不要損傷到肝臟。