欧美老妇与禽交看免费黄片_韩国Av片永久免费翘臀美女XX00后进式视频在线观看_av大片国产A级视频_久久久久久一级精品无码一级做a爱视频全过程_女子爽爽高潮潮喷视频综合网爽爽爽爽_国产亚洲日韩在线a不卡波多野结衣潮喷无码_史上最爽乱婬视频免费看avcom_av超碰av超碰人人爱55夜色66夜色国产精品视频_色狼AVwww.wuma_看黄片.com免费A∨在线观看网站,精品国色天香一卡2卡3卡,巨大欧美黑人xxxxbbbb,中文字幕免费在线看线人动作大片

細(xì)胞瞬時(shí)/穩(wěn)定轉(zhuǎn)染

Column:Cell platform Time:2024-04-16
細(xì)胞轉(zhuǎn)染的基本原理是將外源的DNA克隆到載體上后導(dǎo)入細(xì)胞,,借助宿主細(xì)胞表達(dá)載體上的目的片段,從而使目的基因在細(xì)胞中發(fā)揮功能,。目前轉(zhuǎn)染方法有多種,,如脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法、磷酸鈣-DNA共沉淀法,、電穿孔轉(zhuǎn)染法,、腺病毒感染等。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的基本原理是將外源的DNA克隆到載體上后導(dǎo)入細(xì)胞,,借助宿主細(xì)胞表達(dá)載體上的目的片段,,從而使目的基因在細(xì)胞中發(fā)揮功能。目前轉(zhuǎn)染方法有多種,,如脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法,、磷酸鈣-DNA共沉淀法、電穿孔轉(zhuǎn)染法,、腺病毒感染等,。

常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為兩大類,一類是瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,,另一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的外源DNA不整合到宿主的染色體中,通常表達(dá)只持續(xù)幾天,,一般在轉(zhuǎn)染24-72小時(shí)后檢測(cè),。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的外源DNA將整合到宿主染色體中,可持續(xù)性表達(dá),,一般用于穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建,。

服務(wù)內(nèi)容

脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染(瞬轉(zhuǎn))

1.載體構(gòu)建(可選),RNAi合成(視轉(zhuǎn)染情況而定),;

2.將細(xì)胞按照1~3x105接種到6孔板中,,加入2~4mL的完全培養(yǎng)基,混勻放置在二氧化碳培養(yǎng)中,,37過夜,;

3.無菌狀態(tài)下配置如下液體:

  a.100μLOpti-MEM培養(yǎng)基稀釋2μg的待轉(zhuǎn)染質(zhì)粒,;

  b.100μLOpti-MEM培養(yǎng)基稀釋25μLLipofectamine轉(zhuǎn)染試劑;

4.a, b液混合并混勻,,室溫放置15min,;

5.細(xì)胞培養(yǎng)至80%單層左右,用Opti-MEM培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,,每孔加入1mL Opti-MEM培養(yǎng)基,,并將混合后的ab溶液逐滴加入到每孔中,按十字方向輕搖混勻,,二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;

6. 4-6小時(shí)后將轉(zhuǎn)染液吸出,換為新的完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),,培養(yǎng)3-4天后檢測(cè)蛋白表達(dá)量,。

腺病毒轉(zhuǎn)染(瞬轉(zhuǎn))

1.腺病毒質(zhì)粒構(gòu)建;

2.以脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法包裝腺病毒,,測(cè)其滴度,;

3.不同MOI下測(cè)試得最佳轉(zhuǎn)染效率值;

4.使用最佳MOI對(duì)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染,。

慢病毒轉(zhuǎn)染(穩(wěn)轉(zhuǎn))

1.慢病毒質(zhì)粒構(gòu)建,;

2.以脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法包裝慢病毒,測(cè)其滴度,;

3.不同MOI下測(cè)試得最佳轉(zhuǎn)染效率值,;

4.使用最佳MOI對(duì)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染;

5.進(jìn)行穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選,。