TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)檢測(cè)是用來(lái)檢測(cè)組織細(xì)胞在凋亡早期過(guò)程中細(xì)胞核DNA的斷裂情況,原理是生物素biotinylate標(biāo)記的dUTP在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT Enzyme)的作用下,,可以連接到凋亡細(xì)胞中斷裂DNA的3’-OH末端,,并與連接辣根過(guò)氧化酶(HRP,horse-radish peroxidase)的鏈霉親和素streptavidin特異性結(jié)合,,后者又與POD底物H2O2,、二氨基聯(lián)苯胺(DAB)產(chǎn)生深棕色反應(yīng),特異準(zhǔn)確地定位正在凋亡的細(xì)胞,,因而在光學(xué)顯微鏡下即可觀察凋亡細(xì)胞,;由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒(méi)有DNA斷裂,因而沒(méi)有3‘-OH形成,,很少能夠被染色,。
實(shí)驗(yàn)流程圖
結(jié)果展示