銀屑病是什么,？

皮膚由三層：表皮,、真皮層和皮下層組成。每一層都有各種皮膚附屬物,，如汗腺,、直立肌和皮脂腺。健康的皮膚會(huì)形成皮膚層并不斷更新,，死皮脫落,，新皮再生，這就是我們所說的皮膚的自然更替。而作為以T細(xì)胞介導(dǎo)為主的自身免疫性皮膚病,，銀屑?。≒soriasis），又稱牛皮癬,，是一種慢性非感染性炎癥性皮膚病,，復(fù)發(fā)性高、可遺傳,，可能無法永久性治愈,。患者皮膚更新緩慢,，所以當(dāng)新的皮膚層出現(xiàn)時(shí),，死細(xì)胞不會(huì)脫落，形成死細(xì)胞(角化細(xì)胞)的斑塊或皮膚結(jié)痂,。 這些斑塊會(huì)引起疼痛,、發(fā)炎，甚至四分五裂,，產(chǎn)生傷口,，可能出血也會(huì)形成鱗狀皮膚。該病表現(xiàn)為軀體多處紅斑,、丘疹,，覆以銀白色鱗屑，發(fā)病不受年齡和地域限制,，通常伴有糖尿病,、高血壓、抑郁癥和非酒精性脂肪肝等疾??；患者表皮過度增生，皮膚中含有過多的免疫細(xì)胞,，可產(chǎn)生大量的細(xì)胞因子,、趨化因子和炎癥分子。

皮膚的結(jié)構(gòu)（DOI：10.1517/17460441.2013.761202）

銀屑病的組織病理學(xué)結(jié)構(gòu)（https://blog.ho     la.com/farmaciameritxell/）

患者的癥狀頑固,、病因錯(cuò)綜復(fù)雜,，嚴(yán)重的甚至?xí)職垼o個(gè)人,、家庭及社會(huì)帶來嚴(yán)重困擾,，其發(fā)病機(jī)制尚未闡明，特別是在人類白細(xì)胞抗原HLA-C*06：02風(fēng)險(xiǎn)等位基因的存在下,，鏈球菌感染,、壓力,、吸煙、肥胖和飲酒等因素都會(huì)加重病情,。銀屑病目前還不能治愈,，應(yīng)在疾病發(fā)展早期開展治療，同時(shí)改善生活方式,，從而盡量減輕痛苦,。

自20世紀(jì)80年代初以來，T細(xì)胞在銀屑病發(fā)病機(jī)制中的重要性一直為人所知,，許多經(jīng)典免疫細(xì)胞（包括樹突狀細(xì)胞和中性粒細(xì)胞）和非經(jīng)典免疫細(xì)胞（如角質(zhì)形成細(xì)胞）參與了疾病的發(fā)生,。這些細(xì)胞之間的通信主要通過細(xì)胞因子如TNFα、IFN-γ,、IL-17和IL-22發(fā)生,，并通過角質(zhì)形成細(xì)胞的激活，驅(qū)動(dòng)表皮的過度增殖和抗菌蛋白,、生長(zhǎng)因子和趨化因子的產(chǎn)生,。這些因素促進(jìn)了銀屑病的特征性變化，包括血管生成,、中性粒細(xì)胞浸潤(rùn),、輔助T細(xì)胞1型(Th1)和Th17細(xì)胞數(shù)量的增加，創(chuàng)造了一個(gè)自我維持的炎癥循環(huán),。這些是長(zhǎng)期存在的非循環(huán)的記憶T細(xì)胞,，進(jìn)化到能夠提供對(duì)病原體的快速保護(hù)的程度，當(dāng)被異常激活時(shí),，就會(huì)發(fā)揮作用,。免疫學(xué)和遺傳學(xué)研究已經(jīng)證明IL-17和IL-23是銀屑病發(fā)病的關(guān)鍵因素。通過生物療法對(duì)這些細(xì)胞因子和TNFα的靶向免疫治療,，能夠有效抑制疾病的發(fā)展,。

銀屑病的免疫發(fā)病機(jī)制和銀屑病斑塊（DOI：10.1016/S0140-6736(20)32549-6 ）

而新藥的開發(fā)、探究和臨床前CRO,，都需要一個(gè)比較理想的動(dòng)物模型,，相應(yīng)的，它還應(yīng)具有 以下的特征①相似的臨床表現(xiàn),，如組織學(xué)性狀和病理學(xué)情況,；②炎癥因子增多、血管化程度加深,；③對(duì)銀屑病常用藥物敏感,。

如何應(yīng)對(duì),？

那現(xiàn)在都有哪些銀屑病動(dòng)物模型可供選擇呢,？小鼠模型可分為自發(fā),、基因工程(轉(zhuǎn)基因和敲除)、異種移植和直接誘導(dǎo),。

一,、基因工程小鼠：

    采用基因編輯技術(shù)，過表達(dá)或敲除動(dòng)物體內(nèi)某種特定基因,。KRT5-JunB/Jun 缺陷小鼠,，具有與相似的皮膚炎癥和關(guān)節(jié)炎表現(xiàn)] ；KRT14-IKKβ 缺陷小鼠,，皮膚炎癥明顯,、表皮增厚、分化異常,；白細(xì)胞介素1α轉(zhuǎn)基因小鼠模型,，患關(guān)節(jié)炎，毛發(fā)脫落,，身形消瘦,，皮膚皺縮，還伴有動(dòng)脈炎癥,。

二,、自發(fā)疾病性動(dòng)物模型：

    在自然條件下出現(xiàn)，或者經(jīng)遺傳育種篩選得到的由于基因突變的產(chǎn)生的動(dòng)物模型,。目前發(fā)現(xiàn)的自發(fā)產(chǎn)生銀屑病樣病變的動(dòng)物模型存在各種問題,，尚未廣泛使用，如Ttcfsn/ Ttcfsn鼠,，會(huì)自發(fā)表現(xiàn)為皮膚鱗屑,、炎癥、角化過度的形狀,，但其生長(zhǎng)周期短,，加之表皮生長(zhǎng)因子受體和IgE抗體水平高，且對(duì)常見的銀屑病治療藥物無應(yīng)答機(jī)制,；ic/ic突變鼠,，病理表現(xiàn)與臨床結(jié)果不同等。

三,、異體移植動(dòng)物模型：

    該模型可通過異種移植模型和同種不同品系小鼠間移植獲得,。前者的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是將人體組織或細(xì)胞移植給免疫缺陷小鼠，如裸鼠（T 淋巴細(xì)胞免疫缺陷鼠）,、SCID 小鼠（體液和細(xì)胞免疫雙重缺陷小鼠）和AGR129 小鼠（ T 淋 巴細(xì)胞,、B 淋巴細(xì)胞和成熟的 NK 細(xì)胞缺失），目前最常用于新藥研發(fā)的是SCID 小鼠,，但其成本較高,，對(duì)操作手法和實(shí)驗(yàn)環(huán)境有嚴(yán)苛的要求,。

    后者的實(shí)驗(yàn)方案的疾病復(fù)制效果并不佳，且小鼠種間的差異,，會(huì)干擾到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的評(píng)判,，不建議采用。

四,、急性炎癥動(dòng)物模型：

    該模型可由藥物誘導(dǎo)和的皮膚損傷兩種方式獲得,。藥物誘導(dǎo)的方法有：局部外用、真皮內(nèi)注射和口服,。咪喹莫特（IMQ）作為Toll樣受體（TLR）7/8的激動(dòng)劑,，既能基本復(fù)制皮膚損傷的表型，也能使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的免疫功能降低,，這是與銀屑病病人相似的,，因而被廣泛使用。而其他造模方法如真皮內(nèi)注射白細(xì)胞介素,；對(duì)小鼠造成機(jī)械損傷等,，已逐漸棄用。

用于銀屑病研究的小鼠模型（DOI:10.3390/ijms18122514)

拓普怎么做,？

為了“讓天下沒有難治的疾病”這一愿景盡快落地,，拓普生物已經(jīng)打磨出一套成熟的IMQ誘導(dǎo)造模的實(shí)驗(yàn)方案。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：

SPF級(jí)BALB/c 小鼠,，6-8 周齡

實(shí)驗(yàn)方法：

1.    小鼠經(jīng)適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后,，進(jìn)行隨機(jī)分組（實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組），然后背部脫毛,；

2.  在皮膚暴露區(qū)涂抹 5%的IMQ 軟膏,，予同等劑量的凡士林軟膏處理，連續(xù)6天,；

3.  實(shí)驗(yàn)期間需每日觀察小鼠的一般狀態(tài),，包括進(jìn)食進(jìn)水、活動(dòng)度,、皮毛色澤等,，如有死亡應(yīng)該及時(shí)記錄；為評(píng)估皮損嚴(yán)重程度,，采用改良的銀屑病皮損面積和嚴(yán)重程度指數(shù)（PASI）法,，包括紅斑、鱗屑,、皮膚厚度三項(xiàng)指標(biāo),，以0~4分進(jìn)行計(jì)分（見表1）。評(píng)分頻率為1天1次,。

表1 PASI評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

4.    小鼠處死后取下造模區(qū)域處的皮膚組織，取一部分固定在福爾馬林中,，可用于后續(xù)的病理檢測(cè),。

5.    小鼠皮損組織ELISA檢測(cè)

取小鼠部分皮損組織，冰上勻漿后離心取上清,，ELISA法測(cè)定上清中IL-23,、IL-17、IL-22,、TNF-α,、IFN-γ的含量。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

1.    表型觀察：

經(jīng)IMQ處理的小鼠,，造模開始后0-6d,，皮膚逐漸變厚，并伴有紅斑,、干燥銀白色鱗屑,，皮膚松弛且損傷嚴(yán)重。

2.    病理結(jié)果：

模型組小鼠背部皮膚和表皮厚度的表型表現(xiàn)及相應(yīng)的組織學(xué)分析(H&E染色,，x200),，有明顯的棘皮增生、角化不全,、膿皰和脫屑,，炎癥性白細(xì)胞浸潤(rùn)真皮。

   對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組 BALB/c小鼠的HE染色結(jié)果（ DOI: 10.3892/ijmm.2017.2930）

 高達(dá)90%的新藥研發(fā)在臨床III期失敗,，主要原因是缺乏臨床療效,，這表明具有高度預(yù)測(cè)性和可操作性的人類疾病動(dòng)物模型是非常重要的。在慢性炎癥反應(yīng),、炎癥循環(huán)和免疫代謝動(dòng)力學(xué)的研究中,，銀屑病動(dòng)物模型將有更多應(yīng)用，有助于開發(fā)新的治療方法,。