由于免疫組化染色過程中存在很多步驟或環(huán)節(jié),，每一個步驟或環(huán)節(jié)都可能影響到染色的最終結(jié)果,，因此，要做好一張高質(zhì)量的免疫組化切片并不是一件非常容易的事,，下面總結(jié)了幾點小問題,，希望能給到幫助。

組織取材要快，不宜過大,，太大太厚的組織不利于均勻一致的固定,，取材厚度應(yīng)小于5mm，避免人為損傷,。

固定的目的是①防止標(biāo)本從玻片上脫落,；②除去防礙抗原-抗體結(jié)合的類脂，使抗原抗體結(jié)合物易于獲得良好的染色結(jié)果,；③固定的標(biāo)本易于保存,。組織取材后應(yīng)即刻固定，常用固定液有中性甲醛,、4%多聚甲醛（推薦使用）,，固定體積10倍于組織，固定時間6-24小時,，固定時間不夠或過長,，都有可能引起抗原丟失,。

切片的質(zhì)量關(guān)系著免疫組化染色好壞,，保持切出的組織完整、平整,，切片皺褶,、邊緣卷曲會造成之后試劑難以洗凈，顯色時這些區(qū)域著色會增強,。

三級二甲苯脫蠟,，每次脫蠟15分鐘，脫蠟徹底,，二甲苯使用次數(shù)不宜太多,，每100張片子更換一次（每周更換一次也是可以的）。

由于組織中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定過程中,，發(fā)生了蛋白之間交聯(lián)及醛基的封閉作用,，從而失去抗原性；通過抗原修復(fù),，使得細(xì)胞內(nèi)抗原決定族重新暴露,，提高抗原檢測率。修復(fù)方法有酶修復(fù),、高壓熱修復(fù),、微波熱修復(fù)，不同抗原有各自最適的修復(fù)方式,，對大多數(shù)的抗原來說微波熱修復(fù)都能得到很好的效果,。對于修復(fù)液大多數(shù)使用PH6.0的檸檬酸鈉修復(fù)液，但大多數(shù)的抗體使用EDTA（PH8.0或9.0）修復(fù)液效果好于PH6.0的檸檬酸鈉修復(fù)液

一抗孵育條件在免疫組化反應(yīng)中最重要,，包括孵育時間,、溫度和抗體濃度,。一抗孵育溫度有幾種： 4 度、室溫,、37 度,，其中 4 度效果最佳；孵育時間：這與溫度,、抗體濃度有關(guān),，一般 37 度 1-2h，4 度過夜（從冰箱拿出后 37 度復(fù)溫 45min） ,。具體條件還要摸索,。二抗孵育條件：二抗一般室溫或 37 度 30min-1h，具體時間需要摸索......

顯色液應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用,，肉眼或顯微鏡下觀察,，當(dāng)有明顯棕色出現(xiàn)，應(yīng)終止顯色,，顯色時間不宜過長造成背景染色,。