作為科研民工底層的鏟屎官，以為只要本鏟屎官老老實實鏟屎,，勤勤懇懇換籠,，本本分分造模,，寫文章,、看文獻這種費頭發(fā)的高大上工作與本鏟屎官無緣。
直到數(shù)周前……人艱不拆，累覺不愛，生無可戀

繁殖嘛,？合籠完事。鑒定嘛,？pcr干他,。至于寫出個千把字的公眾號文章，臣妾做不到哇,。

罷了罷了,，先從何為基因鼠開始？
        能穩(wěn)定遺傳且表達外源基因的小鼠即我們一般意義上所說的轉(zhuǎn)基因小鼠,。話說,，第一只攜帶外源基因的小鼠是Rudolf Jaenisch于1974年通過將SV40 病毒的DNA注射到小鼠的囊胚創(chuàng)造出來的。后來又有研究人員把Murine leukemia病毒注射到小鼠胚胎得到了能通過生殖系統(tǒng)穩(wěn)定遺傳的小鼠,，且該外源基因能在后代中穩(wěn)定表達,。自此，針對小鼠的基因編輯工程便一發(fā)不可收拾直至今日,。如今,，轉(zhuǎn)基因小鼠的制備技術主要有大兩類，DNA原核顯微注射法和胚胎干細胞囊胚顯微注射法,。

DNA原核顯微注射法
        DNA原核顯微注射法就是通過顯微操作將外源基因直接注入受精卵,，使得外源基因整合到DNA中，發(fā)育成轉(zhuǎn)基因鼠的方法,。通過該方法通常我們會獲得很多個帶有外源基因插入的首建鼠（Founder）,。每一個首建鼠，外源基因插入的位置或次數(shù)都是不同的,。所以每個首建鼠（F0）都應該自成一系,，也就是我們說的建系。首先,，F0要與野生型小鼠（比如：C57BL/6J）交配,，獲得基因型明確的 F1 子代 KO 雜合子（+/-）小鼠。隨后,，才能進行雜合子小鼠的相互交配,。
胚胎干細胞囊胚顯微注射法
       原理與DNA原核顯微注射法類似，不同是在體外將外源基因?qū)肱咛ジ杉毎?，然后將轉(zhuǎn)基因的胚胎干細胞通過顯微操作儀注入動物囊胚,，此胚胎干細胞可參與宿主的胚胎構(gòu)成，形成嵌合體,，直至達到種系嵌合,。由于嵌合體小鼠個體中含有不同來源的細胞,，即該生物體中嵌合了兩種不同遺傳結(jié)構(gòu)的細胞，其后代會出現(xiàn)不可預見的遺傳性狀的分離,，故嵌合體小鼠不能直接用于科學研究，必須采用回交的方式得到穩(wěn)定遺傳的基因打靶種系后才能使用,。
基因鼠的繁育
       基于基因編輯技術的高端性,，基因編輯鼠的價格較為昂貴。一般實驗室一次只能購買幾只甚至一只基因鼠,。因此我們在得到基因鼠后要盡快安排繁育計劃,，以確保繁殖出足夠多的基因鼠供實驗及保種需求。
因為我們一般從商家拿到鼠都是具有穩(wěn)定遺傳性的雜合子基因編輯鼠F1,，所以,，我們的繁育也是從雜合子開始。首先,，用雜合子與野生型交配,，基于孟德爾遺傳定律，可以獲得50%的雜合子和50%的野生型鼠,；再通過雜合子繁育可理論上獲得1/4的純合子,。

       而對于條件性敲出或敲入鼠，其繁育要相對復雜一些,，因為他們首先要與Cre鼠進行交配,，經(jīng)過鼠尾鑒定后得到雜合之，再進行純合子繁育,。
最后,，提煉下基因鼠鑒定的那些要點，記牢哈,，不再重復第二遍了,。。,。

基因鼠的鑒定

1. 剪尾取樣編號

2. DNA提取

3. Pcr

4. 瓊脂糖凝膠電泳

5. 成像分析并記錄,。
   

6. 
   

最后的最后，祝大家早日發(fā)paper.