細(xì)胞毒性是由細(xì)胞或化學(xué)物質(zhì)引起的單純細(xì)胞殺傷事件，不依賴于凋亡或壞死的細(xì)胞死亡機(jī)理,。藥物篩選常常要涉及到特定物質(zhì)對細(xì)胞毒性的檢測,。有研究顯示化學(xué)物質(zhì)體外細(xì)胞毒性與其引起的動物死亡率及人體死亡的血藥濃度之間都存在良好的相關(guān)性?；瘜W(xué)物質(zhì)產(chǎn)生的損傷和死亡,，最終可表現(xiàn)為細(xì)胞水平上的改變，由此推測體外細(xì)胞毒性可以預(yù)測體內(nèi)急性毒性,。利用細(xì)胞毒理學(xué)比較多種檢測終點(diǎn),、不同組織和種屬的預(yù)測能力，發(fā)現(xiàn)嚙齒動物細(xì)胞系對嚙齒動物急性毒性,，人源細(xì)胞系對人體急性毒性均有良好的預(yù)測能力,。

  
  體外方法有助于預(yù)測化學(xué)物質(zhì)急性暴露引發(fā)的全身和局部影響，并評估體內(nèi)毒性濃度,。因此進(jìn)行急性毒性檢測前首先進(jìn)行體外細(xì)胞毒性分析,，然后根據(jù)RC預(yù)測模型進(jìn)行LD50值預(yù)測，選擇體內(nèi)急性毒性最適宜的開始劑量,，減少實驗動物的使用,。

CCK-8法檢測細(xì)胞增殖和毒性分析

CCK8全稱為cell?counting?kit-8試劑，可用于簡便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析,。該試劑的關(guān)鍵組分是水溶性唑鹽WST–8:化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽,，它在電子載體1-Methoxy PMS的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產(chǎn)物。生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,。用酶聯(lián)免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值,，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。

CCK-8法 KO MTT 法的優(yōu)勢：

重復(fù)性優(yōu)于MTT,；

CCK-8法對細(xì)胞比較友好,，毒性小，線性范圍更寬,，靈敏度更高,；

水溶性，不需要換液,，尤其適合于懸浮細(xì)胞,；

CCK-8法細(xì)胞毒性檢測步驟可以按照試劑盒說明一步一步來即可，這里就不在累贅了,，但是,，重點(diǎn)來了,！tips還是非常重要滴，拿走不謝~~

1,、首次做實驗時,建議先做幾個孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK8試劑后的培養(yǎng)時間,；

2、接種時注意細(xì)胞懸液一定要混勻,以避免細(xì)胞沉淀下來,導(dǎo)致每孔中的細(xì)胞數(shù)量不等,可以每接種幾個孔就混勻一下,；

3,、懸浮細(xì)胞與貼壁細(xì)胞相比較難顯色。對于懸浮細(xì)胞在加入CCK-8培養(yǎng)1-4小時后,可先從培養(yǎng)箱中取出,目測染色程度或用酶標(biāo)儀測定決定,。若顯色困難,可將培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱,繼續(xù)培養(yǎng)數(shù)小時后再確定,；

4、 加CCK-8試劑時,，斜貼著培養(yǎng)壁加,，不要插到培養(yǎng)基液面下，容易產(chǎn)生氣泡,，會干擾O.D值讀數(shù),；

5、為使CCK-8試劑和培養(yǎng)基充分混勻,建議在加入CCK-8試劑后輕輕振搖培養(yǎng)板,。為了避免加樣時由于CCK-8試劑在槍頭上的殘留所帶來的誤差,可以在加樣前用培養(yǎng)基稀釋CCK-8試劑并混勻后加樣,；

6、如果待測物質(zhì)有還原性,，就會和CCK-8試劑發(fā)生顯示反應(yīng),，增加吸光度，如果藥物有氧化性則降低吸光度,。請檢查背景的OD值,，即在不含細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入藥物,然后加入CCK-8試劑在一定時間內(nèi)檢測,和不加藥物的培養(yǎng)基進(jìn)行比較(只加CCK-8試劑),如果OD值明顯偏高,則說明有反應(yīng)，也可以在加CCK-8之前更換新鮮培養(yǎng)基,，去掉藥物影響。

7,、加入待測物質(zhì)的濃度需要多參考文獻(xiàn),，選擇合適的濃度梯度進(jìn)行篩選。

8,、盡量使用多通道移液器,，可以減少平行孔間差異。

9,、如果樣品為高渾濁度的細(xì)胞懸液,，可以設(shè)定600nm作為參比波長，扣除參比波長的OD值,。