細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)

當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)成近100%密度單層狀態(tài)時(shí)，在該單層細(xì)胞上人為劃出空白區(qū)域--劃痕,，在所劃出痕跡邊緣的細(xì)胞會(huì)逐漸進(jìn)入到劃出的空白區(qū)域,，使痕跡愈合。

我們?yōu)槭裁匆黾?xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn),？

細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)優(yōu)點(diǎn)包括：

1.它一定程度上模擬了細(xì)胞在體內(nèi)的遷移,；

2.適合研究細(xì)胞與細(xì)胞，細(xì)胞與胞外基質(zhì)之間因?yàn)橄嗷プ饔枚鴮?dǎo)致的細(xì)胞遷移,；

3.重要的是該實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)單,，價(jià)格便宜！

細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)常用材料

6孔板,、marker筆、直尺,、100ul黃槍頭,、PBS、基礎(chǔ)培養(yǎng)基等

細(xì)胞劃痕步驟：

1.畫線：用marker筆在6孔板背后,，用直尺比著均勻畫線,，每隔0.5-1cm畫一條線，橫穿過整排孔,。每孔穿過4-5條線,。
2.鋪細(xì)胞：在6孔板孔中加入約50萬個(gè)細(xì)胞（每種細(xì)胞有所差異，保證過夜能長(zhǎng)到100%）,。
3.劃痕：第二天,，細(xì)胞長(zhǎng)滿后，用100ul黃槍頭垂至背后的橫線在孔中劃痕。
4.清洗：用PBS清洗細(xì)胞3次,，以洗掉劃下的細(xì)胞,，加入無血清的基礎(chǔ)培養(yǎng)基（此時(shí)可以加入藥物，以研究該藥物對(duì)細(xì)胞遷移的影響）,。
5.拍照：放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要在不同時(shí)間點(diǎn)拍照。

6.分析：可用Image J軟件對(duì)傷口閉合度進(jìn)行評(píng)估

    
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細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：

1.細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)選擇細(xì)胞時(shí)尤其適用于具有遷移能力的上皮細(xì)胞,，避免選擇生長(zhǎng)緩慢,、貼壁不牢、長(zhǎng)不滿或堆積生長(zhǎng)的細(xì)胞,，如巨噬細(xì)胞等,。

2.在劃痕前細(xì)胞要鋪滿，但不能長(zhǎng)得又太密,，否則可能在劃痕時(shí)成片滑落,。

3.一般使用無血清的基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)，如果培養(yǎng)時(shí)間久或者無血清對(duì)細(xì)胞影響嚴(yán)重,，可以用1%血清,，但血清濃度最大一般不超過2%。

4.拍照時(shí),，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)拍照的位置要一致,，要拍同一個(gè)地方，否則結(jié)果無法分析,。

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