細(xì)胞毒性是指由細(xì)胞或者化學(xué)物質(zhì)引起的單純的細(xì)胞殺傷事件,，不依賴于凋亡或壞死的細(xì)胞死亡機(jī)理。

CCK-8實(shí)驗(yàn)原理：

CCK-8 試劑中含有 WST–8 ,，它在電子載體 1- 甲氧基 -5- 甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產(chǎn)物,，生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。用酶聯(lián)免疫檢測儀在 450nm 波長處測定其光吸收值,，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量,。

優(yōu)點(diǎn) ：

靈敏度高,，數(shù)據(jù)可靠，重復(fù)性好,，操作簡便,，省時(shí)省力,毒性小

實(shí)驗(yàn)流程：

1、取對數(shù)生長期細(xì)胞接種至96孔板中,，每孔加入細(xì)胞懸液100ul,，2000～5000個(gè)細(xì)胞

2、待細(xì)胞貼壁后,，換入100ul含不同濃度待測樣品的完全培養(yǎng)基

3,、根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，待藥物作用24h,、48h或72h后加入10ulCCK8溶液,，繼續(xù)培養(yǎng)1～4h

4.、取出96孔板,，放置酶標(biāo)儀450 nm處檢測吸光,。

實(shí)驗(yàn)孔設(shè)置：

1、空白組（綠色）：培養(yǎng)基

2,、對照組（粉色）：培養(yǎng)基+細(xì)胞+PBS

3,、給藥組（紅色）：培養(yǎng)基+細(xì)胞+待測樣品

4、白色孔加入100ulPBS或培養(yǎng)基,，以緩解蒸發(fā)

注意事項(xiàng):

1.細(xì)胞懸液加入96孔板前,，應(yīng)充分混勻，以免每孔加入細(xì)胞量不相等,。

2,、96 孔板周圍一圈液體容易蒸發(fā)，應(yīng)當(dāng)加入等量的PBS 或培養(yǎng)基,，以緩解蒸發(fā),。

3、CCK-8 的培養(yǎng)時(shí)間一般為1～4 h,，重復(fù)實(shí)驗(yàn)必須保證相同培養(yǎng)時(shí)間。

4,、CCK-8試劑顏色與培養(yǎng)基顏色幾乎相同,，必須集中注意力加入，以免漏加,。

5,、酶標(biāo)儀檢測吸光度時(shí)，震蕩時(shí)間不能少于15 S,，以免孔內(nèi)試劑顏色不勻,。