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哇塞,,超全子宮內膜異位動物模型構建!

發(fā)布時間:2024-04-19
EMT動物模型主要分為自發(fā)性,、誘發(fā)性及種植性三類方法

子宮內膜異位癥(endometriosis,,EMT)指子宮腔內具有活性的內膜組織出現(xiàn)在子宮腔以外的位置,,是一種常見的婦科疾病。異位的內膜周期性出血及其周圍組織纖維化,,導致異位結節(jié),,痛經(jīng),慢性盆腔痛,,月經(jīng)異常和不孕等,,對患者的生活質量和心理健康都帶來嚴重的影響,。

目前對EMT的研究集中在藥物療效,病理機制等方面,。由于倫理道德的原因,,很難對患病婦女進行全程觀察,也不能進行創(chuàng)傷性,、侵襲性或者對照性實驗研究,。因此,動物模型成為研究該病的重要手段,。
 EMT動物模型主要分為自發(fā)性,、誘發(fā)性及種植性三類方法。自發(fā)性的周期長,、成本高,,且實驗動物必須有規(guī)律的月經(jīng)周期;種植法又稱異體移植法,,將人的異位內膜組織種植于實驗動物體內,,處于醫(yī)學倫理的考慮,此法不適用于實驗研究的推廣,;誘發(fā)性方法中,,手術移植法最為常用,分為同種異體移植法和自體移植法兩種,。同種異體移植法避免對實驗動物子宮完整性的破壞,,對受體動物創(chuàng)傷性較小,有文章用該法成模率可達到66.7%,。但該法使用率不高,,可能實驗動物對同種屬來源的內膜組織免疫排斥等因素導致成模率不太穩(wěn)定。自體移植法成模率較高,,對實驗動物要求不高,,成本低廉,因此自體移植法構建EMT動物模型成為該領域實驗研究的主要方法,,多用來觀察EMT的免疫發(fā)病機制和藥物治療作用,,也是我們今天主要介紹的方法。

靈賦拓普之選:

SPF級SD大鼠,,雌性,,動情周期規(guī)律6-8周,。
操作方法:術前使用小劑量雌激素使子宮內膜充血水腫,,增加血液循環(huán),有利于移植物存活,、生長,。
麻醉小鼠后,,于腹部正中做小切口。切除左側子宮角,,放入生理鹽水中,。將子宮內膜從肌肉中剝離,,然后切成小塊(5mm),。在腹壁上做一個皮下口袋,然后將子宮碎片朝向腹肌放置在口袋中,。術后立即皮下注射苯甲酸雌二醇30μg/ kg,,連續(xù)10d,建立大鼠子宮內膜異位癥模型,。
  
造模之后,,不要忘記肌注雌二醇,有利于移植的內膜生長,。
成模判斷標準
建模兩周后,,開腹,觀察移植物的生長情況:
符合以下條件者為成功模型:
移植物體積增大,,呈隆起透亮的小囊狀,,有些形成多房囊腫,內有液體積聚且積液高度≥2mm,,外被結締組織或大網(wǎng)膜覆蓋并有血管生成,;游標卡尺測量移植物的體積≥8mm3;切取移植物送病檢,,證實是存活的異位子宮內膜組織,。


  實驗設計舉例

     



動物處死后開腹探查異位灶面積,形態(tài),,位置,,有無粘連等
取異位灶進行HE染色,觀察子宮內膜腺體和間質,。

         
                 HE染色

   

        
                             免疫組化檢測


數(shù)據(jù)來源:Mert Ilhan,,Zulfiqar Ali,Ikhlas A. Khan,,Hakk? Tas? tan,,Esra Küpeli Akkol,The regression of endometriosis with glycosylated flavonoids isolated from Melilotus officinalis (L.) Pall. in an endometriosis rat model,,Taiwanese Journal of Obstetrics & Gynecology 59 (2020) 211e219.

                                       

                             Western blot

數(shù)據(jù)來源:Rosalba Siracusa,,Ramona D’Amico,Daniela Impellizzeri,,Marika Cordaro,,etc,,Autophagy and Mitophagy Promotion in a Rat Model of Endometriosis,Int. J. Mol. Sci. 2021, 22, 5074.

  免疫熒光

數(shù)據(jù)來源:Wenliang Su,, Huan Cui,,Danning Wu,Jiawen Yu,, Lulu Ma,,etc. Suppression of TLR4-MyD88 signaling pathway attenuated chronic mechanical pain in a rat model of endometriosis, Su et al. Journal of Neuroinflammation (2021) 18:65.

根據(jù)具體的實驗需求,,還可以把內膜移植到所需位置,,如卵巢包膜輸卵管、子宮系膜,、腸系膜及腹壁的各部,、腓腸肌等。