一,、人類臨床信息
同種異體造血細(xì)胞移植是治療難以治愈的血液病的常規(guī)的,、成熟的治療方法,，其最常見的危及生命的并發(fā)癥是移植物抗宿主?。?span style="font-family: "Times New Roman", Times, serif;">Graft versus Host Disease, GvHD）,。當(dāng)供體組織（移植物）中的免疫功能正常的T細(xì)胞將受體（宿主）識(shí)別為外來物質(zhì)時(shí),，就會(huì)發(fā)生GvHD,，其所產(chǎn)生的免疫反應(yīng)會(huì)激活供體T細(xì)胞,，使其擁有溶解細(xì)胞的能力,、攻擊受體以消除攜帶外來抗原的細(xì)胞。臨床上主要有急性GvHD（aGvHD）和慢性GvHD（cGvHD）兩種,。在所有同種異體造血細(xì)胞移植患者中,，30%-50%發(fā)生aGVHD；在接受同種異體造血干細(xì)胞移植(同種異體移植)的非操縱供體移植物,，并接受鈣調(diào)磷酸酶抑制劑和抗代謝物的標(biāo)準(zhǔn)預(yù)防的患者中,，30%-70%發(fā)生cGvHD。典型的aGvHD體征包括皮膚斑丘疹,、高膽紅素血癥伴肝臟膽汁淤積,、小膽管損傷導(dǎo)致的黃疸、惡心,、嘔吐和厭食,，以及水樣或血性腹瀉和痙攣性腹痛（即累及皮膚、肝臟,、上下消化道,，還有肺臟）；cGvHD不僅累及aGvHD可累及到的臟器,，還會(huì)影響其他多個(gè)臟器或系統(tǒng),，如：口腔、食管,、骨骼與肌肉,、關(guān)節(jié)、筋膜,、眼睛,、淋巴造血系統(tǒng),、頭發(fā)與指/趾甲、生殖系統(tǒng)等,。常見皮膚,、黏膜、軟組織的硬化,、纖維化,，高眼壓、肺臟纖維化^{[1, 2]},。

為了深入了解疾病機(jī)制,、預(yù)后及生物標(biāo)志物的開發(fā)，cGvHD小鼠模型作為臨床前實(shí)驗(yàn)工具發(fā)揮了重大的作用,。目前cGvHD小鼠模型主要有2種：①同種異體小鼠模型,，主要用于研究cGvHD進(jìn)展機(jī)制和治療方法；②人源化小鼠模型,，更利于臨床轉(zhuǎn)化,。

1. 同種異體小鼠模型

通常使用具有不同的主要組織相容性復(fù)合體（major histocompatibility complex, MHC）的2種小鼠，分別作為供體和受體,，最常見使用C57BL/6（H-2b）為供體,、BALB/c（H-2d）為受體，或C57BL/6為供體,，CB6F1（C57BL/6雄鼠與BALB/c雌鼠雜交的雌性后代）為受體（H-2d）,。其中BALB/c作為受體時(shí)，稱為完全異基因移植,，CB6F1作為受體時(shí),，稱為半相合基因移植。供體選擇雄性,、受體選擇雌性小鼠,，年齡多使用8±2周齡^[3]。
ABX小鼠構(gòu)建：由于受體動(dòng)物制備cGvHD模型前,，需經(jīng)過輻照破壞自身原有免疫系統(tǒng),，這會(huì)使得受體變得非常脆弱，故通常給受體小鼠進(jìn)行腸道微生物清掃處理,，形成抗生素清掃鼠（ABX鼠）,，一般使用萬古霉素、青霉素、甲硝唑,、新霉素,、紅霉素、慶大霉素,、鏈霉素等抗生素進(jìn)行組合,。在小鼠接收輻照前后若干天時(shí)間，在小鼠的飲用水中加入含有一定劑量的上述抗生素物質(zhì)飼喂小鼠（亦可使用灌胃+飲水方法）,，可形成ABX小鼠,。
動(dòng)物輻照：根據(jù)受體鼠種類的不同，選擇合適的輻照方式及劑量,。注意：市售輻照儀的射線源品種有所不同，如鈷60,、X射線,、γ射線等，不同射線由于散射程度,、穿透能力等原因,，會(huì)造成同劑量不同射線輻照效果有所區(qū)別，但一般不會(huì)過于明顯,。建議與ABX劑量一起進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)條件摸索,。
供體鼠PBMC懸液制備及受體回輸：處死供體鼠，摘取脾臟,、長(zhǎng)骨骨髓制備為單細(xì)胞懸液后,，尾靜脈注射的方式回輸?shù)揭呀?jīng)接受動(dòng)物輻照的受體鼠體內(nèi)。其中,，回輸?shù)募?xì)胞懸液的細(xì)胞濃度在5×10^6cells/ml-1×10^7cells/ml不等（有可能會(huì)更多,，較少使用更少的劑量）。脾單細(xì)胞和骨髓單細(xì)胞可選分別注射,、混合后一同注射,、只選擇1種進(jìn)行提取制備并注射。最終可引起cGvHD模型病變程度的不同,。

1. 人源化小鼠模型

GvHD模型在臨床上常見于同種異基因的個(gè)體間的移植,，為了更貼合臨床研究，常使用人外周血單個(gè)核淋巴細(xì)胞（human peripheral blood mononuclear cells (hPBMCs)）,，代替小鼠的脾臟,、骨髓單細(xì)胞懸液，用以回輸?shù)绞荏w小鼠體內(nèi),。hPBMC需要先通過MACS進(jìn)行磁珠分選（或無菌FACS流式分選）,，去除B細(xì)胞成分后再回輸?shù)叫∈篌w內(nèi)（部分研究不予去除B細(xì)胞成分）。小鼠同樣要接受輻照破壞免疫系統(tǒng),，之后接受新鮮hPBMC懸液的回輸^[4],。

1. 造模鑒定方法

    對(duì)于cGvHD,，2005年美國國立衛(wèi)生研究院(NIH)共識(shí)會(huì)議建立了一套臨床上的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，該標(biāo)準(zhǔn)從器官層面出發(fā),，綜合評(píng)估了皮膚,、頭發(fā)、指/趾甲,、肝,、肺、消化道,、生殖器官等器官/系統(tǒng)的癥狀程度,，以鑒定cGvHD綜合病情^[5]。2014年國家衛(wèi)生研究院的共識(shí)以新的證據(jù)為基礎(chǔ),以進(jìn)一步的完善為基礎(chǔ),維持了先前共識(shí)的框架,，其在2005年頒布的版本上又進(jìn)行了若干調(diào)整^[6],。2014年共識(shí)標(biāo)準(zhǔn)明確了慢性GVHD的重疊亞類別，并建議記錄慢性GVHD患者的所有臨床特征,，這些特征與預(yù)后,、治療指導(dǎo)、反應(yīng)評(píng)估,、生物標(biāo)志物研究和臨床試驗(yàn)相關(guān),。
進(jìn)行小鼠實(shí)驗(yàn)也有相應(yīng)的cGvHD臨床評(píng)分及組織病理學(xué)評(píng)分^{[7, 8]}。

【參考文獻(xiàn)】
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