一,、人類臨床信息
同種異體造血細胞移植是治療難以治愈的血液病的常規(guī)的,、成熟的治療方法，其最常見的危及生命的并發(fā)癥是移植物抗宿主?。?span style="font-family: "Times New Roman", Times, serif;">Graft versus Host Disease, GvHD）,。當供體組織（移植物）中的免疫功能正常的T細胞將受體（宿主）識別為外來物質(zhì)時，就會發(fā)生GvHD,，其所產(chǎn)生的免疫反應會激活供體T細胞,，使其擁有溶解細胞的能力、攻擊受體以消除攜帶外來抗原的細胞,。臨床上主要有急性GvHD（aGvHD）和慢性GvHD（cGvHD）兩種,。在所有同種異體造血細胞移植患者中，30%-50%發(fā)生aGVHD,；在接受同種異體造血干細胞移植(同種異體移植)的非操縱供體移植物，并接受鈣調(diào)磷酸酶抑制劑和抗代謝物的標準預防的患者中，30%-70%發(fā)生cGvHD,。典型的aGvHD體征包括皮膚斑丘疹,、高膽紅素血癥伴肝臟膽汁淤積、小膽管損傷導致的黃疸,、惡心、嘔吐和厭食,，以及水樣或血性腹瀉和痙攣性腹痛（即累及皮膚,、肝臟,、上下消化道，還有肺臟）,；cGvHD不僅累及aGvHD可累及到的臟器,，還會影響其他多個臟器或系統(tǒng)，如：口腔,、食管、骨骼與肌肉,、關節(jié),、筋膜,、眼睛,、淋巴造血系統(tǒng)、頭發(fā)與指/趾甲,、生殖系統(tǒng)等,。常見皮膚,、黏膜,、軟組織的硬化、纖維化,，高眼壓、肺臟纖維化^{[1, 2]},。

為了深入了解疾病機制、預后及生物標志物的開發(fā),，cGvHD小鼠模型作為臨床前實驗工具發(fā)揮了重大的作用,。目前cGvHD小鼠模型主要有2種：①同種異體小鼠模型,，主要用于研究cGvHD進展機制和治療方法；②人源化小鼠模型,，更利于臨床轉(zhuǎn)化,。

1. 同種異體小鼠模型

通常使用具有不同的主要組織相容性復合體（major histocompatibility complex, MHC）的2種小鼠,，分別作為供體和受體,，最常見使用C57BL/6（H-2b）為供體,、BALB/c（H-2d）為受體,，或C57BL/6為供體,，CB6F1（C57BL/6雄鼠與BALB/c雌鼠雜交的雌性后代）為受體（H-2d）,。其中BALB/c作為受體時,，稱為完全異基因移植，CB6F1作為受體時,，稱為半相合基因移植,。供體選擇雄性、受體選擇雌性小鼠,，年齡多使用8±2周齡^[3],。
ABX小鼠構建：由于受體動物制備cGvHD模型前，需經(jīng)過輻照破壞自身原有免疫系統(tǒng),，這會使得受體變得非常脆弱,，故通常給受體小鼠進行腸道微生物清掃處理，形成抗生素清掃鼠（ABX鼠）,，一般使用萬古霉素,、青霉素,、甲硝唑、新霉素,、紅霉素,、慶大霉素、鏈霉素等抗生素進行組合,。在小鼠接收輻照前后若干天時間,，在小鼠的飲用水中加入含有一定劑量的上述抗生素物質(zhì)飼喂小鼠（亦可使用灌胃+飲水方法），可形成ABX小鼠,。
動物輻照：根據(jù)受體鼠種類的不同,，選擇合適的輻照方式及劑量。注意：市售輻照儀的射線源品種有所不同,，如鈷60、X射線,、γ射線等,，不同射線由于散射程度、穿透能力等原因,，會造成同劑量不同射線輻照效果有所區(qū)別,，但一般不會過于明顯。建議與ABX劑量一起進行預實驗條件摸索,。
供體鼠PBMC懸液制備及受體回輸：處死供體鼠,，摘取脾臟、長骨骨髓制備為單細胞懸液后,，尾靜脈注射的方式回輸?shù)揭呀?jīng)接受動物輻照的受體鼠體內(nèi),。其中，回輸?shù)募毎麘乙旱募毎麧舛仍?×10^6cells/ml-1×10^7cells/ml不等（有可能會更多,，較少使用更少的劑量）,。脾單細胞和骨髓單細胞可選分別注射、混合后一同注射,、只選擇1種進行提取制備并注射,。最終可引起cGvHD模型病變程度的不同。

1. 人源化小鼠模型

GvHD模型在臨床上常見于同種異基因的個體間的移植,，為了更貼合臨床研究,，常使用人外周血單個核淋巴細胞（human peripheral blood mononuclear cells (hPBMCs)），代替小鼠的脾臟,、骨髓單細胞懸液,，用以回輸?shù)绞荏w小鼠體內(nèi)。hPBMC需要先通過MACS進行磁珠分選（或無菌FACS流式分選）,，去除B細胞成分后再回輸?shù)叫∈篌w內(nèi)（部分研究不予去除B細胞成分）,。小鼠同樣要接受輻照破壞免疫系統(tǒng),，之后接受新鮮hPBMC懸液的回輸^[4]。

1. 造模鑒定方法

    對于cGvHD,，2005年美國國立衛(wèi)生研究院(NIH)共識會議建立了一套臨床上的評分標準,，該標準從器官層面出發(fā)，綜合評估了皮膚,、頭發(fā),、指/趾甲、肝,、肺,、消化道、生殖器官等器官/系統(tǒng)的癥狀程度,，以鑒定cGvHD綜合病情^[5],。2014年國家衛(wèi)生研究院的共識以新的證據(jù)為基礎,以進一步的完善為基礎,維持了先前共識的框架，其在2005年頒布的版本上又進行了若干調(diào)整^[6],。2014年共識標準明確了慢性GVHD的重疊亞類別,，并建議記錄慢性GVHD患者的所有臨床特征，這些特征與預后,、治療指導,、反應評估、生物標志物研究和臨床試驗相關,。
進行小鼠實驗也有相應的cGvHD臨床評分及組織病理學評分^{[7, 8]},。

【參考文獻】
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