1模型簡(jiǎn)介

膿毒癥（sepsis）是指由感染引起的機(jī)體器官功能障礙并且伴有多種細(xì)胞因子和炎性介質(zhì)的誘導(dǎo),、合成和釋放的綜合癥,。

其發(fā)病機(jī)制異常復(fù)雜,，可進(jìn)一步轉(zhuǎn)變?yōu)槟摱拘孕菘?、嚴(yán)重膿毒癥 ,，也是導(dǎo)致多器官功能障礙綜合征（ MODS ）的重要原因,。

2造模方法

造模方式

目前的各類文獻(xiàn)報(bào)道中的常見(jiàn)的膿毒癥模型有：

（1）內(nèi)毒素（LPS）模型

（2）盲腸結(jié)扎穿孔（CLP）模型

（3）結(jié)腸支架植入腹膜炎（CASP）

（4）大腸桿菌輸注的膿毒癥模型

（5）植入充滿細(xì)菌的蛋白凝塊

（6）肺炎誘導(dǎo)膿毒癥模型

造模方法

操作方法（盲腸結(jié)扎穿孔）

①動(dòng)物分組：C57BL/6雄性小鼠（25-30g），動(dòng)物適應(yīng)性生長(zhǎng)一周,，隨機(jī)分為2組，對(duì)照組和模型組,，模型組采用盲腸結(jié)扎穿刺法,，對(duì)照組做開(kāi)腹、縫合處理,。

②用異氟烷麻醉小鼠,，用電動(dòng)剃毛刀取出腹部毛發(fā)，并用碘伏對(duì)該區(qū)域進(jìn)行消毒,。

③用手術(shù)刀縱向切開(kāi)皮膚中線,，識(shí)別腹部肌肉組織的白線（中間的白色筋膜），并對(duì)其進(jìn)行肌間切開(kāi)和筋膜層和腹膜層的切開(kāi),，使用鈍解剖鉗定位盲腸,，分離盲腸并將其外部化，將小腸和大腸的其余部分留在腹膜腔內(nèi),，在大多數(shù)情況下,，盲腸位于腹部左側(cè)。切口也可選在左側(cè)髖關(guān)節(jié)處往上的位置,。

④在指定位置對(duì)盲腸進(jìn)行結(jié)扎,，已獲得所需的嚴(yán)重程度等級(jí)。

⑤盲腸穿刺前,，將盲腸內(nèi)容物輕輕推向盲腸遠(yuǎn)端,，在盲腸穿刺時(shí)，輕輕吸出任何截留的空氣或氣體,。在結(jié)扎和盲腸尖端之間的中間,，在腸系膜到反腸方向上，通過(guò)單穿和全穿的方式對(duì)盲腸進(jìn)行穿孔,。

⑥拔出針頭后,，從腸系膜和抗腸系膜穿透孔中擠出少量（液滴）糞便，以確保通暢。

⑦將盲腸重新定位到腹腔中,，而不會(huì)將盲腸中的糞便擴(kuò)散到腹壁傷口邊緣,。

⑧通過(guò)簡(jiǎn)單的連續(xù)縫合閉合腹膜、筋膜和腹部肌肉組織,。

3造模細(xì)節(jié)與差異

盲腸處理

用鈍頭彎鑷輕輕帶出盲腸,，注意不要損壞腸系膜，確保不要結(jié)扎回盲瓣,，穿孔的時(shí)候小心避免刺破血管,，保持腸道的活性及連續(xù)性。

結(jié)扎比例

手術(shù)關(guān)鍵:

結(jié)扎的（ 盲腸遠(yuǎn)端到結(jié)扎之間的距離 ）：（ 結(jié)扎到回盲瓣的距離 ） 比例一致,。

①　輕度敗血癥的比例 25% ：75%

②　中度敗血癥的比例 50% ：50%

③　重度敗血癥的比例 75% ：25%

總結(jié)：越靠近遠(yuǎn)端結(jié)扎 癥狀越輕

在CLP模型中,，盲腸結(jié)扎長(zhǎng)度明顯影響小鼠死亡率。但對(duì)于應(yīng)按比例結(jié)扎或是按固定長(zhǎng)度結(jié)扎無(wú)一致標(biāo)準(zhǔn),，其相應(yīng)的死亡率也有較大差異 ,。

小鼠的盲腸長(zhǎng)度變異較大，其范圍約在2.8~4.3cm之間,，四分位數(shù)間距（ 0.4cm ）個(gè)體間存在一定差異,，若全部按固定長(zhǎng)度結(jié)扎（ 較多文獻(xiàn)選用1cm作為小鼠盲腸結(jié)扎的標(biāo)準(zhǔn)長(zhǎng)度 ) ，可能會(huì)造成較大變異,，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。故結(jié)扎前使用軟尺先測(cè)量整體盲腸長(zhǎng)度（回盲部-盲腸末端） ，再按照比例結(jié)扎,。

穿孔

穿孔數(shù)量：?jiǎn)慰?、?duì)穿孔（ 2孔 ）、多孔

針頭規(guī)格：0.7#（22G）,、21G,、1.2#（18G）

擠出的腸內(nèi)容物大小

糞便擠出后，將盲腸放回腹腔時(shí)注意不要將糞便蹭在外表皮膚上,，若糞便沒(méi)有進(jìn)入腹腔可能會(huì)導(dǎo)致造模失敗,。

有研究表明，將造模后仍存活7d的小鼠解剖,，解剖發(fā)現(xiàn)盲腸穿刺部位已經(jīng)被腹膜,、腸管完全包裹，限制了膿毒癥反應(yīng)的進(jìn)一步加重,。

術(shù)后護(hù)理

關(guān)鍵步驟：

術(shù)后,，皮下注射預(yù)熱生理鹽水（ 37℃；5ml/100g ）促使動(dòng)物復(fù)蘇,。

此外,，預(yù)熱生理鹽水（ 37℃ ) 以避免體溫過(guò)低,，這很可能會(huì)影響造模的結(jié)果。

術(shù)后護(hù)理要求:

蘇醒前,，放置保溫墊上保持體溫

蘇醒后,，將動(dòng)物放回溫度控制（ 22℃ ）籠子里，自由進(jìn)食,、飲水,，晝夜節(jié)律為12小時(shí)，飼養(yǎng)環(huán)境應(yīng)保持干凈,，盡量無(wú)菌,，防止造成二次感染。有條件可每6小時(shí)監(jiān)測(cè)動(dòng)物生命體征一次,，統(tǒng)計(jì)死亡率,。

4后續(xù)檢測(cè)

評(píng)分觀察

觀察大鼠/小鼠的狀態(tài)：外觀，自主意識(shí),，自主活動(dòng),，對(duì)刺激的反應(yīng)，眼睛是否有分泌物,，呼吸頻率，呼吸質(zhì)量,。

成模標(biāo)準(zhǔn)

膿毒癥成模標(biāo)準(zhǔn):

動(dòng)物出現(xiàn)發(fā)熱,，心率、呼吸頻率明顯加快,，口鼻腔分泌物增多,，脫水、皮毛豎立,，體重下降,，稀便，精神萎靡,，嗜睡,，蜷縮，少動(dòng),，少食或拒食,，眼角出現(xiàn)分泌物等，此外,，至少一個(gè)器官功能障礙為嚴(yán)重膿毒癥成模標(biāo)準(zhǔn),，常見(jiàn)能引起急性腎臟損傷。

動(dòng)物于術(shù)后12h全身炎性反應(yīng)達(dá)峰值,，12 小時(shí)后觀察小鼠活動(dòng)次數(shù)明顯減少,，出現(xiàn)呼吸急促、精神萎靡、白細(xì)胞計(jì)數(shù)及血 IL-6 水平升高,。其中出現(xiàn)3項(xiàng)也可判斷為建模成功,。

1.血清炎癥因子檢測(cè)：ELISA檢測(cè)模型大鼠/小鼠血清TNF-α（腫瘤壞死因子-α）、（白細(xì)胞介素）IL-1,、IL-4,、IL-6等

2.腎臟檢測(cè)（選用）：目前較為敏感的腎臟損傷標(biāo)志物，如中性粒細(xì)胞酯酶,、胱抑素C及最為常用的肌酐,。該三項(xiàng)腎損傷指標(biāo)均在 CLP 造模后2h開(kāi)始升高。

3.透射電鏡：腎小管上皮細(xì)胞稍腫脹,，細(xì)胞壞死,、微血栓形成及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，有細(xì)胞空泡形成,，空泡中含有被吞噬的線粒體結(jié)構(gòu),。