定點突變是指通過聚合酶鏈式反應（PCR）等方法向目的DNA片段（可以是基因組,，也可以是質(zhì)粒）中引入所需變化（通常是表征有利方向的變化）,，包括堿基的添加,、刪除,、點突變等,。

單點突變原理
    單點突變的原理是從常規(guī)E.coli中經(jīng)純化試劑盒(Miniprep)或者氯化銫純化抽提得到質(zhì)粒。設計一對包含突變位點的引物（正,、反向）,，和模版質(zhì)粒退火后用PfuTurbo聚合酶“循環(huán)延伸”，(所謂的循環(huán)延伸是指聚合酶按照模版延伸引物,，一圈后回到引物5’端終止,，再經(jīng)過反復加熱褪火延伸的循環(huán)，這個反應區(qū)別于滾環(huán)擴增,，不會形成多個串聯(lián)拷貝,。)正反向引物的延伸產(chǎn)物退火后配對成為帶缺刻的開環(huán)質(zhì)粒。DpnI酶切延伸產(chǎn)物,，由于原來的模版質(zhì)粒來源于常規(guī)大腸桿菌,，是經(jīng)dam甲基化修飾的，對DpnI敏感而被切碎（DpnI識別序列為甲基化的GATC,，GATC在幾乎各種質(zhì)粒中都會出現(xiàn),，而且不止一次），而體外合成的帶突變序列的質(zhì)粒由于沒有甲基化而不被切開,，因此在隨后的轉(zhuǎn)化中得以成功轉(zhuǎn)化,，即可得到突變質(zhì)粒的克隆。

多點突變原理
    多點突變的原理是準備多個帶突變的引物（同方向,，對同一單鏈模版）,，退火后全部突變引物（不超過5個）都結合在同一環(huán)狀單鏈模版，PfuTurbo聚合酶延伸,，碰到下一個引物就停止,，各片斷經(jīng)連接成環(huán)，和單鏈模版組成雜和環(huán),，Dpn I消化雙鏈模版,，也消化雜和環(huán)中的模版，只留下新合成的帶多個突變的單鏈環(huán)（mutant ssDNA）,，得以轉(zhuǎn)化E.coli,，形成雙鏈質(zhì)粒,。資料表明，引入3個定點突變的效率為60%,，5個定點突變的效率為30%,。得到的其他質(zhì)粒是帶有較少定點突變的質(zhì)粒，以引入3個定點突變?yōu)槔?，就是?/span>40% 左右的轉(zhuǎn)化質(zhì)粒是帶有1-2個不同定點突變的質(zhì)粒（因為存在1-2個引物結合模版延伸形成單鏈環(huán)的可能）,。

定點突變應用

（1）研究蛋白質(zhì)相互作用位點的結構、改造酶的不同活性或者動力學特性,；

（2）改造啟動子或者DNA作用元件,；

（3）提高蛋白的抗原性或者是穩(wěn)定性、活性,、研究蛋白的晶體結構,，以及藥物研發(fā)、基因治療等等方面,。