北上廣深的疫情防控逐漸放開了,，師兄也終于順利畢業(yè)了。臨行前實(shí)驗(yàn)室?guī)熜值芙忝靡黄鸪粤祟D踐行飯,，飯桌間除了對(duì)師兄表示熱烈祝賀之外,，剩下的就是我們的滿腹牢騷和對(duì)未來的迷茫擔(dān)憂。師兄看著我們一副副未老先衰的面孔,，語重心長地說：“世界上沒有什么無心插柳,，有的只是努力奮斗之后的水到渠成”，然后指著自己的額頭,，“看這發(fā)際線都后移到頭頂了,，你們的都還在哈。”,，氣氛活躍之際,，師兄從懷里掏出一本筆記本秘籍，“這本筆記本秘籍就留給你們參考吧,，里面記錄了我這數(shù)年動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的避雷指南,，希望對(duì)你們有用”，說完交到我手里,，風(fēng)度翩翩消失在黑夜里……

我如獲珍寶,，伴著大家的默默期待下，打開了秘籍第一頁——乳腺癌動(dòng)物造模避雷指南,，這正好和我開展的課題相關(guān),，我激動(dòng)得熱淚盈眶，這對(duì)我來說,，無異于雪中送炭,！這一刻，覺得作為一個(gè)基層科研求學(xué)女,，也有救了,！

這個(gè)世界對(duì)女人有太多的要求，既要上的廳堂，又要下的廚房,；既要美貌如花,，還要能掙錢養(yǎng)家。職場(chǎng)家庭里受到委屈,，在面對(duì)娃的那一刻,，忍一時(shí)，內(nèi)分泌紊亂,，退一步,，乳腺增生，甚至癌變……

世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機(jī)構(gòu)在報(bào)告中指出,，2020 年乳腺癌成為全球發(fā)病率最高的癌癥[1],，最新研究發(fā)現(xiàn)，全球每 76 s 就有一位乳腺癌確診患者,，這極大威脅了女性的生命健康和生活品質(zhì)^[2],。而動(dòng)物模型( animal model of human diseases)是現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)研究中極為重要的一種實(shí)驗(yàn)方法和手段^[3]，通過動(dòng)物模型能方便,，高效地認(rèn)識(shí)人類疾病的發(fā)生,、發(fā)展規(guī)律和研究防治措施^[4]。

乳腺癌動(dòng)物模型可選動(dòng)物有常規(guī)小鼠,、大鼠,、轉(zhuǎn)基因鼠、免疫缺陷鼠,、犬,、豬、兔和斑馬魚等,。由于大,、小鼠繁殖能力強(qiáng)、飼養(yǎng)條件低,、實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單等,，應(yīng)用最為廣泛。

制備小鼠乳腺移植瘤模型,，可通過皮下注射,、尾靜脈注射,、乳墊以及心內(nèi)注射 4 種方法,，最終發(fā)現(xiàn)乳墊注射制備的乳腺癌模型與臨床病理較類似，比較適合藥理學(xué)評(píng)價(jià)和疾病機(jī)制的研究^[5],。目前男性乳腺癌( MBC) 是一種罕見的惡性腫瘤,，其死亡率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于女性^[6]。最近幾年，男性乳腺癌的發(fā)病率竟然也呈現(xiàn)出升高的趨勢(shì)[7],，而在動(dòng)物造模時(shí)多用雌性小鼠,，雄性的生理特點(diǎn)與患乳腺癌的內(nèi)在聯(lián)系值得科學(xué)家們更深入研究探討。

4T1 細(xì)胞乳腺癌動(dòng)物造模避雷指南 

4T1 細(xì)胞株因其惡性程度高易成瘤,，自發(fā)向肺,、肝、腦等部位轉(zhuǎn)移成為廣泛使用的移植瘤細(xì)胞,。此外,，4T1 細(xì)胞移植瘤模型的生長狀態(tài)及轉(zhuǎn)移部位與人類晚期乳腺癌非常類似，該模型被廣泛應(yīng)用于評(píng)估晚期乳腺癌藥物的研究,。

然而細(xì)胞注射成瘤模型看似簡(jiǎn)單,，最終的成瘤效果漂不漂亮跟諸多因素密切相關(guān)。師兄的秘籍里面全方位地總結(jié)了他的研究歷程,，現(xiàn)在來跟大家一一分享：

1,、腫瘤測(cè)量：4T1 細(xì)胞皮下接種成瘤，移植瘤的大小通過測(cè)量腫瘤的長徑和短徑尺寸計(jì)算而來,，不同實(shí)驗(yàn)者對(duì)同一腫瘤的測(cè)量結(jié)果無法從客觀上統(tǒng)一,，因此建議始終由同一人進(jìn)行腫瘤測(cè)量，減少因不同人測(cè)量造成體積測(cè)量的誤差,。

2,、接種細(xì)胞數(shù)目：在細(xì)胞數(shù)目方面尚未有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。從部分文獻(xiàn)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果來看,，細(xì)胞數(shù)目的使用范圍在 3×104～ 1 × 107個(gè)/只小鼠之間,，跨度可達(dá) 300 倍以上，這必然會(huì)影響藥效評(píng)價(jià),，不利于臨床轉(zhuǎn)化,。細(xì)胞數(shù)目的選擇與多個(gè)方面密切相關(guān)，諸如移植瘤的類型( 原位或皮下) ,、植瘤方式( 直接注射或者手術(shù)植入) ,、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>( 抑制轉(zhuǎn)移或者抑制原發(fā)灶) 等。作為一個(gè)折中方案,，( 0. 3 ～ 1. 0) ×106個(gè)/只小鼠的細(xì)胞數(shù)目值得考慮,。

3、細(xì)胞濃度：在確認(rèn)細(xì)胞數(shù)目的前提下,，細(xì)胞濃度對(duì)植瘤效果也有顯著影響,。其影響往往是隱性的，比如細(xì)胞被懸浮在分散介質(zhì)中有自發(fā)聚集沉淀的傾向,，細(xì)胞濃度越大沉淀可能越快; 細(xì)胞過密也會(huì)影響自身活性,，最終導(dǎo)致移植瘤不均一,。細(xì)胞濃度由細(xì)胞使用數(shù)目與注射體積確定，在一般的移植瘤模型中注射體積多為 100ul,，因此細(xì)胞濃度在 107級(jí)別及以下較為合理,。

為了保證模型均勻、藥效評(píng)價(jià)客觀,，在實(shí)驗(yàn)過程中仍需注意某些問題: ( 1) 最好將細(xì)胞按每只小鼠的注射量單獨(dú)分裝; ( 2) 臨注射前輕柔吹打使細(xì)胞充分分散; ( 3) 在盡量短的時(shí)間內(nèi)用完細(xì)胞,，防止活性降低影響成瘤。

4,、小鼠周齡的選擇：小鼠的年齡與體重由植瘤方式和位置決定,，多數(shù)研究采用 4 ～ 6 周齡、體重 18～ 22 g 的小鼠,，然而這并非最佳選擇,。如果構(gòu)建皮下瘤模型，4 ～ 6 周齡的小鼠足以滿足要求; 若是制作原位瘤采取脂肪墊注射的方法,，此時(shí)小鼠的乳腺發(fā)育不夠充分,，接種時(shí)容易漏掉細(xì)胞。因此,，7 ～ 8周齡的小鼠更適合原位脂肪墊注射,。

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參考資料：

[1] Latest global cancer data: Cancer burden rises to 19. 3 million new cases and 10. 0 million cancer deaths in 2020． ［J / OL］ https: / / www． iarc． fr / fr / news-events / latest-global-cancer-data-cancer-burden-rises-to-19-3-million-new-cases-and-10-0-million-cancer-deaths-in-2020 / ．

[2]何玲,，徐佳，羅弘杉,，等． 體內(nèi)外乳腺癌模型的研究進(jìn)展［J］． 腫瘤,，2020，40( 10) : 725－732．

[3]苗明三,，馬林納,，彭孟凡，等． 中醫(yī)藥動(dòng)物模型研究現(xiàn)狀［J］． 中國比較醫(yī)學(xué)雜志,，2022,，32( 1) : 141－146．

[4]王梓儀，黃淑敏,，張倩,，等． 基于中西醫(yī)臨床病癥特點(diǎn)的甲狀腺功能亢進(jìn)癥動(dòng)物模型分析 ［J］． 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2022,，28( 6) : 192－198．

[5]孫麗華,，崔海峰，彭博,，等． 4 種方法制備小鼠乳腺癌移植瘤模型的比較研究 ［J］． 中國新藥雜志,，2020，29 ( 4) : 449－455．

[6]Fentiman IS,，Fourquet A,，Hortobagyi GN． Male breast cancer［J］． Lancet，2006,，367( 9510) : 595－604．

[7]Abdelwahab Yousef AJ． Male breast cancer: epidemiology andrisk factors ［J］． Semin Oncol,，2017，44( 4) : 267－272．