由于免疫組化染色過程中存在很多步驟或環(huán)節(jié),，每一個步驟或環(huán)節(jié)都可能影響到染色的最終結果，因此,，要做好一張高質量的免疫組化切片并不是一件非常容易的事,，下面總結了幾點小問題,，希望能給到幫助。

組織取材要快,，不宜過大,，太大太厚的組織不利于均勻一致的固定，取材厚度應小于5mm,，避免人為損傷,。

固定的目的是①防止標本從玻片上脫落；②除去防礙抗原-抗體結合的類脂,，使抗原抗體結合物易于獲得良好的染色結果,；③固定的標本易于保存。組織取材后應即刻固定,，常用固定液有中性甲醛,、4%多聚甲醛（推薦使用），固定體積10倍于組織,，固定時間6-24小時,，固定時間不夠或過長，都有可能引起抗原丟失,。

切片的質量關系著免疫組化染色好壞,，保持切出的組織完整、平整,，切片皺褶,、邊緣卷曲會造成之后試劑難以洗凈，顯色時這些區(qū)域著色會增強,。

三級二甲苯脫蠟,，每次脫蠟15分鐘，脫蠟徹底,，二甲苯使用次數(shù)不宜太多,，每100張片子更換一次（每周更換一次也是可以的）。

由于組織中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定過程中,，發(fā)生了蛋白之間交聯(lián)及醛基的封閉作用，從而失去抗原性,；通過抗原修復,，使得細胞內(nèi)抗原決定族重新暴露，提高抗原檢測率,。修復方法有酶修復,、高壓熱修復、微波熱修復,，不同抗原有各自最適的修復方式,，對大多數(shù)的抗原來說微波熱修復都能得到很好的效果,。對于修復液大多數(shù)使用PH6.0的檸檬酸鈉修復液，但大多數(shù)的抗體使用EDTA（PH8.0或9.0）修復液效果好于PH6.0的檸檬酸鈉修復液

一抗孵育條件在免疫組化反應中最重要,，包括孵育時間,、溫度和抗體濃度。一抗孵育溫度有幾種： 4 度,、室溫,、37 度，其中 4 度效果最佳,；孵育時間：這與溫度,、抗體濃度有關，一般 37 度 1-2h,，4 度過夜（從冰箱拿出后 37 度復溫 45min） ,。具體條件還要摸索。二抗孵育條件：二抗一般室溫或 37 度 30min-1h,，具體時間需要摸索......

顯色液應現(xiàn)配現(xiàn)用,，肉眼或顯微鏡下觀察，當有明顯棕色出現(xiàn),，應終止顯色,，顯色時間不宜過長造成背景染色。