圖1：DNA損傷示例圖（圖片來自網(wǎng)絡）

彗星實驗（Comet assay）也被稱為單細胞凝膠電泳實驗（Single cell gel electrophoresis，SCGE）,，是一種在單細胞水平上檢測DNA損傷的技術,。

 真核細胞DNA分子量大，以超螺旋結(jié)構(gòu)存在于細胞核中,。用瓊脂糖凝膠將細胞包埋后,，在細胞裂解液中，細胞膜,、核膜等生物膜結(jié)構(gòu)被破壞,，細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、RNA及其他成分進入凝膠中,，然后擴散到裂解液中,。但核內(nèi)的DNA仍然纏繞在核骨架上并留在原來的位置。在堿性電泳液中（PH>13）,DNA雙鏈解螺旋,，且變性為單鏈,。電泳中，如果DNA沒有損傷,，則將停留在原位,，染色后呈圓形的熒光團，無拖尾出現(xiàn),。如果DNA受損,，斷裂的碎片進入到凝膠中，在電場的作用下,，DNA碎片離開原位向陽極遷移,，形成拖尾。DNA受損越嚴重,，斷裂越多,，產(chǎn)生的碎片就越多、越小,，則向陽極遷移的DNA碎片量就越多,，遷移距離也越長，熒光染色后就能看見彗星樣尾長并且熒光強度增強（彗星樣細胞示意圖如圖2）,。通過相應軟件分析如出現(xiàn)的彗尾長度,、彗尾熒光強度等就可以得到該細胞DNA損傷程度,。

圖2：彗星樣細胞示意圖

各實驗室彗星實驗步驟略有不同，本公司所用步驟如圖3,。

圖3：彗星實驗步驟

 彗星實驗染色后拍照,，如果DNA沒有損傷則會看見圓的熒光團,，沒有拖尾,；如果DNA有損傷，則會看見如圖4所示的彗星樣的拖尾,。

圖4：彗星實驗染色后拍照

在拍照時以tif格式保存圖片,，然后用CASP彗星分析軟件分析。常用的指標包括：尾部DNA百分數(shù),、尾長,、彗星長、尾矩,、Olive尾矩等,，如圖5。 

圖5：彗星實驗結(jié)果統(tǒng)計

此外,，根據(jù)實驗需求,，和對照組比較還能得到彗星樣細胞形成率或稱細胞彗星率。如果用不同藥物或不同濃度處理細胞,，還能得出藥物或者濃度對應圖,。如果是用藥物濃度梯度處理細胞，還能得出DNA損傷的劑量-效應關系圖等,。

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