自2013年美國科學(xué)家詹姆斯·羅思曼,、蘭迪·謝克曼及德國科學(xué)家托馬斯·祖德霍夫因發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的囊泡運(yùn)輸調(diào)控獲得諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng),，Exosome研究晉升為科研熱點(diǎn),，熱度不斷攀升,，2020 年Exosome相關(guān)課題就中標(biāo)兩千余項(xiàng)。下面我們就來聊聊Exosome,，干貨來了,，小伙伴們，接??！

圖注：外泌體相關(guān)研究近年走勢圖

首先我們了解下Exosome的相關(guān)背景知識(shí)：

1什么是Exosome

Exosome（外泌體）是指包含了復(fù)雜 RNA（如mRNA、microRNA） 和蛋白質(zhì)的小膜泡 (30-150nm),，現(xiàn)今,，其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡，廣泛存在于血液,、尿液,、母乳和細(xì)胞培養(yǎng)基等生物體液中。

作為細(xì)胞間通訊及物質(zhì)傳遞的重要載體,，Exosome能調(diào)控靶細(xì)胞內(nèi)多種信號通路,，并根據(jù)來源母細(xì)胞類型及攜帶的蛋白質(zhì)、不同種類的RNA等組分的差異發(fā)揮不同的生物學(xué)功能,。Exosome與腫瘤轉(zhuǎn)移,、細(xì)胞通訊,、免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞凋亡和自噬,、細(xì)胞分化,、組織再生與修復(fù)等密切相關(guān)。

Exosome來源：細(xì)胞培養(yǎng)液上清,、菌液,、血清/血漿、尿液,、組織樣本,，盆腔沖洗液、腫瘤囊腫積液,、關(guān)節(jié)沖洗液等,。

2Exosome提取

超速離心法是Exosome提取最常用的方法，這種方法硬性條件就是需要有冷凍超速離心機(jī),，得到的Exosome量比較多,，但是純度往往不足，電鏡時(shí)發(fā)現(xiàn)Exosome聚集成塊,，難以判定究竟是微囊泡還是Exosome,。

試劑盒提取Exosome操作簡單，獲取的Exosome純度與提取效率相對較高,，因而受到大多數(shù)人的歡迎,，尤其適合樣本量不大的小伙伴。

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3Exosome鑒定

Exosome提取是第一步,，之后需要鑒定，一般為三部曲:

01NTA粒徑分析

第一步,，NTA粒徑分析,，納米顆粒跟蹤分析（Nanoparticle TrackingAnalysis,NTA），是對每個(gè)顆粒的布朗運(yùn)動(dòng)進(jìn)行追蹤,，可檢測10nm-1000nm范圍內(nèi)的顆粒,。

02透射電鏡分析

第二步，透射電鏡分析,，分辨率可達(dá)0.1-0.2nm,，是Exosome雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀測的經(jīng)典方法。

03標(biāo)志物鑒定

第三步,，標(biāo)志物鑒定,，根據(jù)Exosome母細(xì)胞來源,，優(yōu)選Exosome標(biāo)志物抗體，如CD9,，CD63,，CD81等，通過細(xì)胞流式檢測以及Western blot檢測做進(jìn)一步鑒定,。

04Exosome分析是關(guān)鍵

眾所周知,，Exosome攜帶mRNA、miRNA和蛋白質(zhì),，這些活性物質(zhì)一旦進(jìn)入其它細(xì)胞，很有可能引起其它細(xì)胞功能上的變化,。通過高通量測序RNA,，可以篩選具有代表性的差異表達(dá)的miRNA，做蛋白組學(xué)分析,，可以研究發(fā)現(xiàn)新的蛋白標(biāo)簽,。

鎖定目標(biāo)分子，探究機(jī)制,，一般是通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究其與某種信號通路相關(guān)因子的作用關(guān)系,，然后再在動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證。

05臨床研究

通過檢測對應(yīng)疾病患者樣本中目標(biāo)分子的表達(dá)水平與疾病關(guān)系,，整理和分析臨床病理特征信息,，進(jìn)一步篩選出如具有潛在早期篩查疾病的Exosome標(biāo)志物等。

總而言之,，Exosome研究離不開以下幾步：

1,、Exosome提取,；

2,、Exosome鑒定；

3,、Exosome功能研究,；

4、Exosome攜帶的分子功能研究,；

5,、Exosome分子水平的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)；

6,、臨床相關(guān)性研究,。

目前，Exosome研究已經(jīng)滲透到生物醫(yī)學(xué)的各個(gè)細(xì)分領(lǐng)域,，比如跟火熱的干細(xì)胞強(qiáng)強(qiáng)聯(lián)合,，在研究各類疾病模型的治療作用方面,；比如研究植物如姜，金銀花提取的Exosome對消化系統(tǒng)及新冠病毒的療效作用等,，毫無疑問,，可以占據(jù)科研熱點(diǎn)的C位了。

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