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哇塞,超全子宮內(nèi)膜異位動物模型構(gòu)建,!

Time:2024-04-19
EMT動物模型主要分為自發(fā)性,、誘發(fā)性及種植性三類方法

子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis,EMT)指子宮腔內(nèi)具有活性的內(nèi)膜組織出現(xiàn)在子宮腔以外的位置,,是一種常見的婦科疾病,。異位的內(nèi)膜周期性出血及其周圍組織纖維化,導(dǎo)致異位結(jié)節(jié),,痛經(jīng),,慢性盆腔痛,月經(jīng)異常和不孕等,,對患者的生活質(zhì)量和心理健康都帶來嚴(yán)重的影響,。

目前對EMT的研究集中在藥物療效,病理機制等方面,。由于倫理道德的原因,,很難對患病婦女進行全程觀察,也不能進行創(chuàng)傷性,、侵襲性或者對照性實驗研究,。因此,動物模型成為研究該病的重要手段,。
 EMT動物模型主要分為自發(fā)性,、誘發(fā)性及種植性三類方法。自發(fā)性的周期長,、成本高,,且實驗動物必須有規(guī)律的月經(jīng)周期;種植法又稱異體移植法,,將人的異位內(nèi)膜組織種植于實驗動物體內(nèi),,處于醫(yī)學(xué)倫理的考慮,此法不適用于實驗研究的推廣,;誘發(fā)性方法中,,手術(shù)移植法最為常用,分為同種異體移植法和自體移植法兩種,。同種異體移植法避免對實驗動物子宮完整性的破壞,,對受體動物創(chuàng)傷性較小,有文章用該法成模率可達到66.7%,。但該法使用率不高,,可能實驗動物對同種屬來源的內(nèi)膜組織免疫排斥等因素導(dǎo)致成模率不太穩(wěn)定,。自體移植法成模率較高,對實驗動物要求不高,,成本低廉,,因此自體移植法構(gòu)建EMT動物模型成為該領(lǐng)域?qū)嶒炑芯康闹饕椒ǎ嘤脕碛^察EMT的免疫發(fā)病機制和藥物治療作用,,也是我們今天主要介紹的方法,。

靈賦拓普之選:

SPF級SD大鼠,雌性,,動情周期規(guī)律,,6-8周。
操作方法:術(shù)前使用小劑量雌激素使子宮內(nèi)膜充血水腫,,增加血液循環(huán),,有利于移植物存活、生長,。
麻醉小鼠后,,于腹部正中做小切口。切除左側(cè)子宮角,,放入生理鹽水中,。將子宮內(nèi)膜從肌肉中剝離,然后切成小塊(5mm),。在腹壁上做一個皮下口袋,,然后將子宮碎片朝向腹肌放置在口袋中。術(shù)后立即皮下注射苯甲酸雌二醇30μg/ kg,,連續(xù)10d,,建立大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型。
  
造模之后,,不要忘記肌注雌二醇,,有利于移植的內(nèi)膜生長。
成模判斷標(biāo)準(zhǔn)
建模兩周后,,開腹,,觀察移植物的生長情況:
符合以下條件者為成功模型:
移植物體積增大,呈隆起透亮的小囊狀,,有些形成多房囊腫,,內(nèi)有液體積聚且積液高度≥2mm,外被結(jié)締組織或大網(wǎng)膜覆蓋并有血管生成,;游標(biāo)卡尺測量移植物的體積≥8mm3,;切取移植物送病檢,證實是存活的異位子宮內(nèi)膜組織,。


  實驗設(shè)計舉例

     



動物處死后開腹探查異位灶面積,,形態(tài),位置,,有無粘連等
取異位灶進行HE染色,,觀察子宮內(nèi)膜腺體和間質(zhì)。

         
                 HE染色

   

        
                             免疫組化檢測


數(shù)據(jù)來源:Mert Ilhan,,Zulfiqar Ali,,Ikhlas A. Khan,Hakk? Tas? tan,,Esra Küpeli Akkol,,The regression of endometriosis with glycosylated flavonoids isolated from Melilotus officinalis (L.) Pall. in an endometriosis rat model,Taiwanese Journal of Obstetrics & Gynecology 59 (2020) 211e219.

                                       

                             Western blot

數(shù)據(jù)來源:Rosalba Siracusa,,Ramona D’Amico,,Daniela Impellizzeri,Marika Cordaro,,etc,,Autophagy and Mitophagy Promotion in a Rat Model of Endometriosis,Int. J. Mol. Sci. 2021, 22, 5074.

  免疫熒光

數(shù)據(jù)來源:Wenliang Su,, Huan Cui,,Danning Wu,Jiawen Yu,, Lulu Ma,,etc. Suppression of TLR4-MyD88 signaling pathway attenuated chronic mechanical pain in a rat model of endometriosis, Su et al. Journal of Neuroinflammation (2021) 18:65.

根據(jù)具體的實驗需求,,還可以把內(nèi)膜移植到所需位置,,如卵巢包膜輸卵管、子宮系膜,、腸系膜及腹壁的各部,、腓腸肌等。