小 RNA是 19~28 nt 的調(diào)控RNA分子,,主要包括微 RNA(micro RNA,miRNA)和小干涉RNA(short interfering RNA,,siRNA)兩類,。 miRNAs是長(zhǎng)片段RNA序列的一部分,同siRNAs一樣是比較短小的單鏈小分子RNA,,一般來(lái)源于染色體的非編碼區(qū)域,,由大約70 nt大小的可形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)的前體加工而來(lái),它通過(guò)與其目標(biāo)mRNA分子的3 端非編碼區(qū)域(3-untranslated region,,3 UTR)互補(bǔ)導(dǎo)致該mRNA分子的翻譯受到抑制,。
microRNA參與基因轉(zhuǎn)錄后調(diào)控活動(dòng),,其中多數(shù)miRNA具有高度序列保守性,、表達(dá)時(shí)序性和組織特異性。最近的研究表明miRNA參與各種各樣的調(diào)節(jié)途徑,,包括發(fā)育,、病毒防御、造血過(guò)程、器官形成,、細(xì)胞增殖和凋亡,、脂肪代謝等,具有重要的基因表達(dá)調(diào)控作用,。
檢測(cè)方法
由于小分子RNA是一類很小的分子,,部分小分子RNA表達(dá)水平可能很低,因而需要極為靈敏而定量的分析工具,。常用的檢測(cè)方法有:
1. Northern blotting
2. 核糖核酸酶保護(hù)分析以及基于此方法的液相雜交,。
3. RT-PCR也被用來(lái)檢測(cè)miRNA前體的表達(dá)水平, 其他基于PCR技術(shù)檢測(cè)miRNA的方法有:引物延伸法,,就是在引物的5 末端加一個(gè)特異標(biāo)記,,可以定量測(cè)定低豐度的RNA含量;原位雜交技術(shù)(CISH,FISH)可以方便的檢測(cè)miRNA的時(shí)空表達(dá)的差異,。
4. 芯片(microarrays)技術(shù)是一種較快的研究miRNA表達(dá)的方法,。