毛發(fā)生長是一個(gè)復(fù)雜的過程,受遺傳,、營養(yǎng),、環(huán)境等因素的影響。脫發(fā)是一種遺傳因素,、自身免疫性疾病,、壓力和營養(yǎng)失衡等引起的毛發(fā)再生障礙,不僅影響容貌,,而且會使患者產(chǎn)生焦慮,、自卑等不良心理。隨著脫發(fā)人數(shù)的增加,,脫發(fā)已成為當(dāng)今社會最常見的健康問題,。頭發(fā)生長周期包括三個(gè)階段:生長期、退行期和休止期,。毛發(fā)生長障礙主要原因是毛囊循環(huán)的改變,,即生長期縮短和休止期延長。因此,,調(diào)控毛囊的生長周期在改善脫發(fā)和促進(jìn)毛發(fā)再生中至關(guān)重要,。
一、為什么要進(jìn)行動物脫毛
1,、動物靜脈注射或抽取血液
2,、用于制備動物脫毛模型
二,、動物被毛去除方法優(yōu)缺點(diǎn)集合
方法 | 優(yōu)缺點(diǎn) |
拔毛法 | 主要適用于家兔耳緣靜脈注射或采血用,不適用于動物其他部位的去毛,。 |
剪毛法 | 如果操作不當(dāng)例如用手捉著動物皮毛剪,,易剪傷動物皮膚,影響下一步實(shí)驗(yàn),。剪毛法的一個(gè)最大的弊端就是剪下的被毛可到處亂飛,,易導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室的污染。 |
剃毛法 | 用剃毛刀剃毛也容易造成動物皮膚的損傷和感染,。 |
脫毛膏脫毛 | 對動物皮膚刺激性小,,脫毛后7 d內(nèi)觀察幾種動物均無皮膚充血和炎癥反應(yīng)等現(xiàn)象。 |
三,、常見的動物脫毛模型方法及作用機(jī)理
1,、松香石蠟拔毛模型:將松香和石蠟融化后按照1 ∶ 1的比例混合,置于室溫適當(dāng)降溫,,防止?fàn)C傷小鼠皮膚,。將松香石蠟混合物均勻涂在小鼠背部,其熱量有利于擴(kuò)張毛囊以利于毛發(fā)脫離,,待混合物變硬后撕除,,可觀察到脫毛后的小鼠背部皮膚呈粉紅色。該方法操作簡單,,耗時(shí)短,。適用于評價(jià)毛發(fā)生長情況、毛發(fā)生長期的研究,。
HE病理觀察毛囊情況:在第 7 天時(shí),,模型組的毛囊大部分仍處于休止期,其毛囊形態(tài)較小,,位置較淺,; 在第 14 天時(shí),毛囊均處于生長期,,模型組黑色素分泌較少,,顏色較淡;在第 21 天時(shí),,模型組毛囊開始退化,,形態(tài)上變短且細(xì)小。
毛發(fā)生長情況評估:在實(shí)驗(yàn)第 0天拔毛后,,小鼠的背部皮膚顏色為粉色,,毛囊同步進(jìn)入休止期。在實(shí)驗(yàn)期間,,可觀察到和脫毛區(qū)域周圍原生毛發(fā)顏色相比,,小鼠新生毛發(fā)顏色較黑,。
2、脫毛膏脫毛模型:將小鼠背部毛發(fā)用電動剃毛器剔除后,,均勻涂抹脫毛膏,,面積約為 2 cm × 2 cm。放置 2 min 后,,輕輕用脫脂棉擦去皮膚表面的脫毛膏,,并用溫水清洗干凈。利用其化學(xué)物質(zhì)軟化并毀斷構(gòu)成毛發(fā)的角質(zhì)蛋白分子鏈,,從而切斷毛發(fā)纖維,,使毛發(fā)脫除。需要注意的是:1次可能會有脫不干凈的情況,,需要重復(fù)操作,。
HE病理觀察毛囊情況:8 周齡小鼠毛囊大部分處于休止期,此時(shí)的毛囊下段退化,,毛乳頭上移至立毛肌附著處,。給藥 6 d后,給藥組小鼠毛囊向下生長至皮下深層,,進(jìn)入生長期,,而 PBS 組仍停滯在真皮層;給藥 12 d 后,,黑色素囤積,,小鼠皮膚毛囊數(shù)增多,給藥組毛囊數(shù)量明顯多于 PBS 組,。
毛發(fā)生長情況評估:在造模完成后立即對小鼠背部進(jìn)行拍照,,此后每 48 h 進(jìn)行拍照。各組脫毛后,,皮膚均呈粉紅色,毛發(fā)進(jìn)入休止期,。給藥 6 d 后,,給藥組開始變黑;給藥 8 d 后,,給藥組明顯變黑而 PBS 組還呈粉紅色,;給藥 12 d 后,給藥組均長出 1 層細(xì)密的毛發(fā),,而對照組僅部分區(qū)域長出毛發(fā),。
3、雄激素性脫發(fā)模型:利用小動物剃毛器將小鼠背部毛發(fā)剃短,,并涂抹脫毛膏使殘余的毛發(fā)脫除,,當(dāng)小鼠皮膚呈粉紅色且無破損時(shí),,即可確認(rèn)其毛囊處于休止期。后以 5 mg/kg的劑量用丙酸睪酮稀釋液于小鼠背部脫毛區(qū)域進(jìn)行皮下多點(diǎn)注射,,1 次/d,,連續(xù)注射 60 d 造模。細(xì)胞質(zhì)中有5α-還原酶能將睪酮轉(zhuǎn)化為二氫睪酮(DHT),,其作用較睪酮強(qiáng)5倍,。DHT進(jìn)入細(xì)胞核,對代謝系統(tǒng)產(chǎn)生作用,,影響毛發(fā)蛋白合成,,致使毛母質(zhì)細(xì)胞失去活力,開始角質(zhì)化,,發(fā)展為休止期毛發(fā),,最終毛發(fā)脫落。另外,,DHT對毛囊產(chǎn)生毒性作用,,使毛囊逐漸萎縮,導(dǎo)致毛發(fā)生長周期縮短,,加速脫發(fā)的進(jìn)程,。該模型的脫毛具有可逆性,適用于脫發(fā)機(jī)制的研究,。
HE病理觀察毛囊情況:與空白組(未注射丙酸睪酮)比較,,模型組小鼠單位面積皮膚組織中含黑色素毛囊數(shù)量與總毛囊數(shù)量比值顯著降低。
毛發(fā)生長情況評估:與空白組(未注射丙酸睪酮)比較,,模型組小鼠新生毛發(fā)面積在脫毛區(qū)域中的占比和新生毛發(fā)的長度及重量均顯著降低,,表明皮下注射丙酸睪酮導(dǎo)致小鼠出現(xiàn)毛發(fā)脫落的現(xiàn)象,且小鼠毛長及毛重降低,。
當(dāng)然除了上述常見的脫毛模型,,還有1、背部涂抹咪喹莫特構(gòu)建免疫調(diào)節(jié)劑脫發(fā)模型,,與人類斑禿相似性較大,,方法簡單、可靠,,重復(fù)性好,,成本低廉;2,、18個(gè)月齡C3H/HeJ小鼠和3-4月齡DEBR大鼠自發(fā)性脫發(fā)模型,,與人體自然衰老所引起的脫發(fā)機(jī)制最為接近;3、應(yīng)用環(huán)磷酰胺腹腔注射,,通過誘導(dǎo)生長期毛囊營養(yǎng)不良性改變或造成更嚴(yán)重的損害,,使毛囊過早地向退行期改變,建立化療脫發(fā)(CIA)模型,,該模型適用于化療藥物引起的脫發(fā)病理生理學(xué)機(jī)制以及實(shí)驗(yàn)藥物治療學(xué)研究,。在實(shí)驗(yàn)研究過程中我們可以從藥物作用機(jī)理出發(fā),選擇對應(yīng)的動物脫毛模型,,從而達(dá)到高效準(zhǔn)確的研究成果,。